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多聚半乳糖醛酸酶（PG）測試盒
閱讀：455 發(fā)布時間：2021-1-6中性木聚糖酶（Neutral Xylanase，NEX）測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素
酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及 β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)
有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)
用于釀造和飼料工業(yè)中，NEX 一般分離自適生長 pH 為 6-8 的微生物。
測定原理：
NEX 在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與 3,5-二
硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在 540nm 處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還
原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在 540nm 吸光值增加速率，可計算 NEX 活力。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋，可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾
水。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體 65mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
粗酶提?。?/span>
1. 發(fā)酵液：發(fā)酵液于 8000g，4℃，離心 15min，取上清，作為待測樣品。
2. 酶干粉：稱約 0.1mg，加緩沖液 1mL，震蕩溶解待測。
測定操作表：
1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 540nm。
2、操作表
對照管 測定管
樣品（μL） 60 60
緩沖液（μL） 90 90
試劑一（μL） 60
試劑二（μL） 90
混勻，蓋緊瓶蓋，50℃水浴，反應(yīng) 30min，立即沸水浴 10min 滅活。(注意不要讓蓋子爆開，
以免進(jìn)水，改變了反應(yīng)體系)
試劑一（μL） 60
試劑二（μL） 90
混勻，沸水浴顯色 5min，取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中，對照管調(diào)零，測定 A540。
NEX 計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.6904x + 0.0058，R
2
= 0.9989
1. 發(fā)酵液 NEX 活力計算
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫升發(fā)酵液每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的
酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/mL）=（A540-0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×1000
= 657×(A540-0.0058 )
2. 酶干粉 NEX 活力計算
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫克酶每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量
為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/mg）= （A540-0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×1000÷W
= 657×(A540-0.0058 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應(yīng)時間，30min；稀釋倍數(shù)=V 反總÷V 樣=300µL÷60µL=5；1000：
轉(zhuǎn)化因子，即 1mmol/L=1000μ mol/L；W：樣本質(zhì)量，mg
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.8452x + 0.0058，R
2
= 0.9989
1. 發(fā)酵液 NEX 活力計算
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫升發(fā)酵液每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的
酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/mL）= （A540-0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×1000
= 1314×(A540-0.0058 )
2. 酶干粉 NEX 活力計算
酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每毫克酶每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量
為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX 活力（nmol/min/mg）= （A540-0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×1000÷W
= 1314×(A540-0.0058 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應(yīng)時間，30min；稀釋倍數(shù)=V 反總÷V 樣=300µL÷60µL=5；
1000：轉(zhuǎn)化因子，即 1mmol/L=1000μ mol/L；W：樣本質(zhì)量，mg
注意事項：
1. 吸光度變化應(yīng)該控制在 0.01~0.8 之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參
與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變；也可以延長或者縮短反應(yīng)時間。
2. 試劑盒 2-8℃保存，保質(zhì)期 3 個月，建議盡快使用。