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大腸菌群及大腸桿菌測(cè)定(FDA與ISO對(duì)比)
閱讀:760 發(fā)布時(shí)間:2021-2-22大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。
大腸菌群不是細(xì)菌學(xué)上的分類命名,而是根據(jù)衛(wèi)生學(xué)方面的要求,提出的與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌,即作為食品、水體等是否受過(guò)人畜糞便污染的指示菌,這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非*一致。根據(jù)進(jìn)一步的生化試驗(yàn),可將這群細(xì)菌再分為大腸艾希氏菌(俗稱大腸桿菌)、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。
大腸桿菌的定義
大腸桿菌(也稱大腸埃希氏菌),分類于腸桿菌科,歸屬于埃希氏菌屬。
大腸桿菌指革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌、乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣、IMViC試驗(yàn)(靛基質(zhì)、MR、V-P、檸檬酸鹽試驗(yàn))為++--或-+--的細(xì)菌。
與人類有關(guān)的大腸桿菌統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌,包括五種:腸毒素性大腸桿菌(ETEC)、致病性大腸桿菌(EPEC)、出血性大腸桿菌(EHEC)、侵襲性大腸桿菌(EIEC)、黏附性大腸桿菌(EAEC)。
衛(wèi)生學(xué)意義
大腸菌群和大腸桿菌是評(píng)價(jià)衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo),作為食品中的糞便污染指標(biāo)。
食品中檢出大腸菌群,表明該食品有糞便污染,既可能有腸道致病菌存在,因而也就有可能通過(guò)污染的食品引起腸道傳染病的流行。大腸菌群數(shù)的高低,表明了糞便污染的程度,也反映了對(duì)人體健康危害性的大小。
大腸桿菌在外界存活時(shí)間與一些主要腸道致病菌接近,它的出現(xiàn)預(yù)示著某些腸道病原菌的存在,因此該菌是上*的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)指示菌。近年來(lái),有些國(guó)家在執(zhí)行HACCP管理中,將大腸桿菌檢測(cè)作為微生物污染狀況的監(jiān)測(cè)指標(biāo)和HACCP實(shí)施效果的評(píng)估指標(biāo)。
大腸桿菌的生物學(xué)特性
基本形態(tài):
此菌為兩端鈍圓的短小桿菌,一般約0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm,多單獨(dú)存在或成雙,但不呈長(zhǎng)鏈排列。約50%的菌株有周生鞭毛,但多數(shù)只有1-4根,一般不超過(guò)10根,故菌體動(dòng)力弱。多數(shù)菌株有菌毛,有的有莢膜或微莢膜,不形成芽孢,對(duì)普通堿性染料著色良好,革蘭氏染色陰性。
培養(yǎng)特性:
大腸桿菌合成代謝能力強(qiáng),在含無(wú)機(jī)鹽、銨鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。適生長(zhǎng)溫度為37℃,在42-44 ℃條件下仍能生長(zhǎng),生長(zhǎng)溫度范圍15-46 ℃。
大腸菌群及大腸桿菌測(cè)定
——MPN法檢驗(yàn)流程(FDA BAM)
——MPN法檢驗(yàn)流程(FDA BAM)
1、檢樣50g+450ml稀釋液
2、適當(dāng)十倍稀釋樣品
3、選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液,每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯(每管9mlLST肉湯并加有導(dǎo)管),每管接種1mL。在35℃下 ,培養(yǎng)24 ± 2h ~48 ± 2h。
4、(1)沒(méi)有產(chǎn)氣管→報(bào)告陰性
(2)有產(chǎn)氣管:①接種BGLB肉湯管→查MPN表報(bào)告結(jié)果(大腸菌群)
②接種EC肉湯 →在44.5±0.5 ℃ (水浴培養(yǎng))24 ± 2h ~48 ± 2h。
→產(chǎn)氣管接種EMB平板(35℃、18~24h),從EMB平板上挑取5個(gè)可疑菌
轉(zhuǎn)接到PCA斜面,進(jìn)行革蘭氏染色、IMVC生化鑒定、接種LST復(fù)檢產(chǎn)氣
→查MPN表報(bào)告結(jié)果(大腸菌群)。
大腸菌群測(cè)定——MPN法檢驗(yàn)幾點(diǎn)說(shuō)明
MPN檢索表:
MPN檢索表只給了三個(gè)稀釋度,如改用不同的稀釋度,則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。
初發(fā)酵和證實(shí)試驗(yàn):
1)兩步法進(jìn)行了兩次乳糖發(fā)酵試驗(yàn)。初發(fā)酵和證實(shí)實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基不同,但都是為了證實(shí)培養(yǎng)物是否符合大腸菌群的定義,即“在37℃分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。
2)初發(fā)酵陽(yáng)性管,不能肯定就是大腸菌群細(xì)菌,經(jīng)過(guò)證實(shí)試驗(yàn)后,有時(shí)可能成為陰性。有數(shù)據(jù)表明,食品中大腸菌群檢驗(yàn)步驟的符合率,初發(fā)酵與證實(shí)試驗(yàn)相差較大。因此,在實(shí)際檢測(cè)工作中,證實(shí)試驗(yàn)是必需的。
產(chǎn)氣量與倒管:
在乳糖發(fā)酵試驗(yàn)工作中,經(jīng)??梢钥吹皆诎l(fā)酵倒管內(nèi)極微少的氣泡(有時(shí)比小米粒還?。?,有時(shí)可以遇到在初發(fā)酵時(shí)產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。實(shí)驗(yàn)表明,大腸菌群的產(chǎn)氣量,多者可以使發(fā)酵倒管全部充滿氣體,少者可以產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。如果對(duì)產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如有疑問(wèn)時(shí),可以用手輕輕打動(dòng)試管,如有氣泡沿管壁上浮,即應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生,而應(yīng)作進(jìn)一步試驗(yàn)。
大腸桿菌測(cè)定——EMB選擇性分離鑒別
EMB平板典型大腸桿菌菌落特征:
中心黑色或紫紅色,有或無(wú)綠色金屬光澤
大腸桿菌測(cè)定——EMB選擇性分離鑒別
EMB是一種弱選擇性培養(yǎng)基,一些球菌也可在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng);l高壓滅菌可使得美藍(lán)還原從而使培養(yǎng)基的顏色呈不均一橘黃色,輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)基可以恢復(fù)原有的正常紫色,傾注平板前應(yīng)先搖勻;
大腸桿菌在該培養(yǎng)基上并不一定總是呈現(xiàn)綠色的金屬光澤;
該培養(yǎng)基受可見(jiàn)光易使其中的成分氧化,儲(chǔ)存及培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)都應(yīng)在避光條件。
大腸桿菌測(cè)定——革蘭氏染色
基本步驟:
將涂片在火焰上固定,滴加結(jié)晶紫染液,染1min,水洗;
滴加革蘭氏碘液,作用1min,水洗;
滴加95%乙醇脫色約15~30s,直至染色液被洗掉,不要過(guò)分脫色,水洗;
滴加番紅復(fù)染液,復(fù)染1min,水洗、待干、鏡檢。
結(jié)果:革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色,革蘭氏陰性菌呈紅色。