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技術(shù)文章

POCT檢測試劑中C線的質(zhì)控原料—雞IgY及羊抗雞IgY

閱讀:1043          發(fā)布時間:2021-8-30

背景介紹

     產(chǎn)生IgY的動物基本是卵生的,存在于禽類血液中的主要免疫球蛋白(IgY)會傳遞給它們的后代,并在蛋黃中積累。

IgY技術(shù)發(fā)展歷程

(引自:IgY-technology (egg yolk antibodies) in human medicine: A review of patents and clinical trials)


      禽類抗體主要集于卵黃中,卵黃中的抗體占禽類本身所有抗體的80%左右,血清中抗體約占19%。禽類體內(nèi)主要存在3種免疫球蛋白,即IgY、IgM和IgA,其中IgY是禽類的主要免疫球蛋白,IgY主要存在于血液和蛋黃中。

IgY、IgG結(jié)構(gòu)圖

(引自:Egg yolk antibodies (IgY) and their applications in human and veterinary health: A review)


禽IgY和哺乳動物IgG之間存在功能同源性,但在分子量,結(jié)構(gòu)和生化功能上存在顯著差異。

相同點:

a.兩者由兩條相同的重鏈和輕鏈組成,通過二硫鍵結(jié)合在一起;

b.它們具有可變的抗原結(jié)合位點和恒定的高度保守區(qū)域。

差異點:

a.IgY分子量更高,IgY的分子量為~167 kDa(重鏈65 kDa,輕鏈19 kDa);b.IgY的重鏈由4個恒定區(qū)(Cv1-Cv4) 和1個可變區(qū)組成;c.IgY沒有鉸鏈區(qū),而IgG有一個鉸鏈結(jié)構(gòu)。這種性質(zhì)使得IgY的Fab片段在結(jié)合抗原存在阻礙,IgY的特殊結(jié)構(gòu)使得它分子量較大,擺動性、柔韌性下降,穩(wěn)定性較高;

d.IgY的疏水基團多于IgG,這恰好使它更適于脂類含量豐富的卵黃環(huán)境。

IgY和IgG的比較

(引自:Egg yolk antibodies (IgY) and their applications in human and veterinary health: A review)

IgY的Fc部分不能激活人補體,不能與類風(fēng)濕因子和蛋白G結(jié)合,也不能與人抗小鼠抗體(HAMA)反應(yīng),也不能與紅細(xì)胞凝集原A和B反應(yīng)。純化的卵黃抗體半衰期為數(shù)月,室溫下活性可達6個月,37℃下活性可達1個月。能抵抗高溫和pH值,在30℃至70℃之間穩(wěn)定,在pH值3.5至11之間活躍。但IgY與抗原的親和力隨溫度升高而降低。


應(yīng)用前景

異性卵黃抗體是作為抗菌素在人類和獸醫(yī)健康中使用的相關(guān)替代藥物。卵黃抗體技術(shù)在人類和獸醫(yī)健康中有廣泛的應(yīng)用。它可以用于多種類型的治療;它可用于預(yù)防各種類型的疾病,并可通過不同的技術(shù)檢測多種抗原,如微生物、腫瘤標(biāo)志物和物質(zhì)。

在POCT檢測試劑中C線的質(zhì)量至關(guān)重要,它能夠?qū)z測試劑產(chǎn)品是否有效、批間一致性及穩(wěn)定、以及樣本定量的準(zhǔn)確性等方面及時、準(zhǔn)確、直觀的判斷。目前在POCT檢測試劑中質(zhì)控體系(標(biāo)記-包被)常見有兔IgG—羊抗兔IgG、鼠IgG—羊抗鼠IgG、雞IgY—羊抗雞IgY,以及獨立質(zhì)控DNP—羊抗DNP等。

雞IgY—羊抗雞IgY相比于其他質(zhì)控體系,更適合用于制作C線:

1.雞IgY易于獲得,可從雞蛋中獲取大量抗體,無需采血;

2.雞IgY批量生產(chǎn)易于控制,可從SPF雞蛋中獲得穩(wěn)定、無特定抗原結(jié)合的抗體;

3.雞IgY與哺乳動物免疫球蛋白之間發(fā)生血清學(xué)交叉反應(yīng)可能性較低,因兩者種系發(fā)生距離相差較大;

4.雞IgY不激活哺乳動物的補體系統(tǒng),不與類風(fēng)濕因子或Fc受體相結(jié)合,可避免在免疫檢測過程中產(chǎn)生假陰性或假陽性結(jié)果;

5.耐酸,巴氏滅菌溫度下不會失活且在pH<3時活性依然穩(wěn)定;

6.比起從哺乳類動物提取的抗體更加穩(wěn)定、方便、可靠;

7.成熟穩(wěn)定的生產(chǎn)工藝,可保證高質(zhì)量的雞IgY的供應(yīng)。


雞IgY及羊抗雞IgY數(shù)據(jù)展示

1雞IgY (Ys-0432P) 純度分析


2雞IgY (Ys-0432P)與羊抗雞IgY (YS-0432G) 在膠體金檢測試劑中的應(yīng)用

1:健康新西蘭兔血清;2:健康BALB/c鼠血清;

3和4:BALB/c鼠血清(經(jīng)免疫);

5和6:人血清(疫苗免疫);

7和8:鼠源單抗;9:健康人血清。


3羊抗雞IgY (Ys-0432G) 特異性分析


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