海腎螢光素酶基因檢測試劑盒

  上海雅吉的海腎螢光素酶基因檢測試劑盒(Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是一種以腸腔素(Coelenterazine)為底物來檢測海腎螢光素酶(Renilla reniformis luciferase，簡稱renilla luciferase)活性的試劑盒。
      海腎螢光素酶是一種分子量約為36kD的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化Coelenterazine氧化成Coelenteramide。在Coelenterazine氧化的過程中，會發(fā)出生物螢光(bioluminescence)。生物螢光可以通過化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀進(jìn)行測定。本試劑盒的檢測原理參考圖1。

通過螢光素和螢光素酶這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達(dá)。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或
5’啟動子區(qū)克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase的下游等，構(gòu)建成報告基因(reporter gene)質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，測定螢光素酶活性。通過螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。海腎螢光素酶一方面常用作螢火蟲螢光素酶報告基因檢測的內(nèi)參，以消除由于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率不同而帶來的誤差；另一方面海腎螢光素酶也可以和螢火蟲螢光素酶一樣被用于常規(guī)的報告基因檢測。
      海腎螢光素酶基因檢測試劑盒海腎螢光素酶催化Coelenterazine發(fā)光的zui強(qiáng)發(fā)光波長為465nm (centered around 465nm)。
      本試劑盒可以測定100個樣品。
包裝清單：
產(chǎn)品編號    產(chǎn)品名稱    包裝
RG016-1    海腎螢光素酶報告基因細(xì)胞裂解液    60ml
RG016-2    海腎螢光素酶檢測緩沖液    10ml
RG016-3    海腎螢光素酶檢測底物(100X)    100μl
—    說明書    1份
保存條件：
      海腎螢光素酶報告基因細(xì)胞裂解液和海腎螢光素酶檢測緩沖液，4℃保存3個月有效，-20℃保存一年有效；海腎螢光素酶檢測底物(100×)，-20℃避光保存6個月有效，-80℃避光保存一年有效。
注意事項：
      為取得*測定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測定時，樣品和測定試劑混合后到測定前的時間應(yīng)盡量控制在相同時間內(nèi)，例如30秒內(nèi)；使用具有化學(xué)發(fā)光測定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入海腎螢光素酶檢測工作液。
      由于溫度對酶反應(yīng)有影響，所以測定時樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測定。
      樣品和測定試劑混合后，必須等待1-2秒，再進(jìn)行測定。測定時間通常為10秒，根據(jù)情況也可以測定更長或更短時間，但是同一批樣品宜使用相同的測定時間。
      海腎螢光素酶檢測底物(100×)配制在無水乙醇中。由于無水乙醇容易揮發(fā)，有時會在初次使用時發(fā)現(xiàn)體積明顯小于100μl的情況，此時用無水乙醇把體積補(bǔ)足至100μl，并混勻后即可使用。
      海腎螢光素酶檢測工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。隨著保存時間的延長檢測效果會不斷下降，因此不可配制成工作液后長期保存。
      為避免由于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞時效率的差異而帶來的誤差，可以同時轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)奈灮鹣x螢光素酶(firefly luciferase)的報告基因質(zhì)粒作為內(nèi)參，采用碧云天的雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒(RG016/RG017)進(jìn)行檢測；也可以同時轉(zhuǎn)入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)報告基因質(zhì)粒作為內(nèi)參，然后采用碧云天生產(chǎn)的β-半乳糖苷酶報告基因檢測試劑盒(RG0036)進(jìn)行檢測。采用本試劑盒中的報告基因細(xì)胞裂解液裂解獲得的樣品可以直接用于β-半乳糖苷酶報告基因檢測試劑盒(RG0036)的檢測。
      僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。