Bradford法蛋白定量試劑盒

Bradford法蛋白定量試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn) Bradford 法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度是Z為常用的蛋白檢測(cè)方法之一，在酸性條件下，考馬斯亮藍(lán)（Coomassie G-250）染料能與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物，其Z大吸光值也由 465 nm 轉(zhuǎn)移到 595 nm，通過(guò)顏色的強(qiáng)弱即可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的高低。

Bradford法蛋白定量試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn) Bradford 法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度是zui為常用的蛋白檢測(cè)方法之一，在酸性條件下，考馬斯亮藍(lán)（Coomassie G-250）染料能與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物，其zui大吸光值也由 465 nm 轉(zhuǎn)移到 595 nm，通過(guò)顏色的強(qiáng)弱即可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的高低。

Bradford法蛋白定量試劑盒產(chǎn)品是基于 Bradford 法蛋白檢測(cè)原理開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品，具備下述特點(diǎn)：
1. 快速，10-20 個(gè)樣品只需要 10 分鐘即可完成測(cè)定。
2. 穩(wěn)定，加樣混勻后 2 分鐘既可測(cè)定，1 小時(shí)內(nèi)吸光度變化不超過(guò) 10%。
3. 線性范圍在 50～1000 µg/mL。
4. zui小測(cè)量體積為 1-20 uL，zui低測(cè)量蛋白量為 0.5 ug。
5. 即開(kāi)即用，不需要單獨(dú)購(gòu)買每個(gè)成分再配制。
6. 有常規(guī)和微量?jī)煞N檢測(cè)模式。
7. 不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。巰基乙醇的濃度可高達(dá) 1M，二硫蘇
糖醇的濃度可高達(dá) 5mM。
8. 受略高濃度的表面活性劑影響，各種蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合效率可能有差異。
9. 本產(chǎn)品至少可以按常規(guī)法測(cè) 200 次，按微量法測(cè) 1000 次。 規(guī)格及成分 成 分 編 號(hào) 小紙盒包裝
溶液 A 80814a 250 mL（棕色瓶）
BSA 標(biāo)準(zhǔn)（2 mg/mL） 131070 1 mL
定性濾紙（直徑 12.5cm） 80814b 50 張
使用手冊(cè) 80814sc 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，BSA 標(biāo)準(zhǔn)需低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。 自備儀器試劑 超純水、分光光度計(jì)
使用方法 一、制備溶液 A 工作液
1. 將試劑盒提供的溶液 A 與自備的超純水按 1：4 比例充分混合即為溶液 A 工作
液 (例：4 mL 溶液 A + 16 mL 超純水= 20 mL 溶液 A 工作液)。每次配制多
少取決于檢測(cè)方法和測(cè)試體積，需要預(yù)先按下面的手冊(cè)計(jì)算。
2. 用本試劑盒提供的濾紙過(guò)濾溶液 A 工作液。過(guò)濾后的工作液室溫條件下可穩(wěn)定
使用 1-2 星期。注意：不同型號(hào)、規(guī)格的濾紙，具有不同的孔徑，導(dǎo)致可通過(guò)
的分子各不相同。請(qǐng)使用本公司提供的濾紙，否則會(huì)導(dǎo)致不同的測(cè)定結(jié)果。 二、制備 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液
3. 測(cè)試開(kāi)始之前，應(yīng)首先制備 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液。本試劑盒使用 BSA 作為
標(biāo)準(zhǔn)品。用戶也可以使用自備的其他蛋白質(zhì)濃度測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)品。每個(gè)濃度具體
需要多少體積取決于檢測(cè)方法和測(cè)試體積，需要預(yù)先按下面的手冊(cè)計(jì)算。沒(méi)有
用完的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液可以放-20℃待下次使用。
a) 如果進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，建議用溶解待測(cè)樣品的緩沖液將 BSA（2 mg/mL）
稀釋成下面的 8 個(gè)濃度：
0µg/mL、31.25µg/mL、62.5µg/mL、125µg/mL、250µg/mL、
500µg/mL、750µg/mL、1000µg/mL
b) 如果進(jìn)行微量檢測(cè)，建議用溶解待測(cè)樣品的緩沖液將 BSA（2 mg/mL）
稀釋成下面的 6 個(gè)濃度：
0µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、7.5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL。 三、常規(guī)檢測(cè)流程
常規(guī)檢測(cè)法在蛋白濃度 30 - 1000 µg/mL 范圍內(nèi)呈現(xiàn) R
2 = 0.996 的直線線
性回歸，可精確定量蛋白濃度在此范圍內(nèi)的蛋白樣品。
4. 在標(biāo)記的離心管中分別加入 N 個(gè)待測(cè)蛋白樣品和 8 個(gè) BSA 梯度稀釋液，然后
再在每個(gè)離心管中按 1:50 的比例加入溶液 A 工作液。終體積多少取決于比色
杯的體積。
如果用 3 mL 比色杯檢測(cè)，則取 100 µL 樣品+5 mL 溶液 A 工作液；
如果用 1 mL 比色杯檢測(cè)，則取 40 µL 樣品+2mL 溶液 A 工作液；
如果用平底透明 96 孔板，則取 20 µL 樣品+1 mL 溶液 A 工作液。
5. 樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。
6. 室溫放置 5 分鐘。
7. 分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度。波長(zhǎng)設(shè)定= 595nm。用 96 孔板測(cè)定時(shí)，應(yīng)確保沒(méi)有
氣泡，否則氣泡會(huì)增加吸光度的讀數(shù)。
8. 將待測(cè)樣品的測(cè)定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測(cè)定值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得
到待測(cè)樣品的蛋白質(zhì)濃度。 四、微量檢測(cè)流程
此方法在蛋白濃度 1～20 µg/mL 范圍內(nèi)呈現(xiàn) R
2 = 0.992 的直線線性回歸，
可精確定量蛋白濃度在此范圍內(nèi)的蛋白樣品。
9. 在標(biāo)記的離心管中分別加入 N 個(gè)待測(cè)蛋白樣品和 6 個(gè) BSA 梯度稀釋液，然后
再在每個(gè)離心管中按 4:1 的比例（注意：不是 1:50）加入溶液 A 工作液。終
體積多少取決于比色杯的體積。
如果用 3 mL 比色杯檢測(cè)，則取 4 mL 樣品+1 mL 溶液 A 工作液；
如果用 1 mL 比色杯檢測(cè)，則取 2 mL 樣品+0.5 mL 溶液 A 工作液；
如果用平底透明 96 孔板，則取 400 µL 樣品+100 µL 溶液 A 工作液。
10. 樣品與溶液 A 工作液混合后，充分震蕩 30 秒混勻。
11. 室溫放置 5 分鐘。
12. 分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度。波長(zhǎng)設(shè)定= 595nm。用 96 孔板測(cè)定時(shí)，應(yīng)確保沒(méi)有
氣泡，否則氣泡會(huì)增加吸光度的讀數(shù)。
13. 將待測(cè)樣品的測(cè)定值逐一跟用 BSA 梯度稀釋液測(cè)定值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得
到待測(cè)樣品的蛋白質(zhì)濃度。

注意事項(xiàng) 1. 不像其它一些蛋白濃度測(cè)定方法（包括 Lowry 法），Bradford 蛋白濃度測(cè)定
的顯色反應(yīng)不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。巰基乙醇的濃度可高達(dá)
1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá) 5mM。但受略高濃度的表面活性劑影響。若
SDS 高于 0.1%，TritonX-100 高于 0.1%，Tween20，60，80 高于 0.06%，
可用稀釋法、透析/除鹽法或 Acetone/TCA 沉淀蛋白后重溶于超純水等方法
再行測(cè)定。對(duì)于難溶解的蛋白樣品，可用 1M NaOH 溶解和稀釋。
2. Bradford 蛋白濃度測(cè)定的顯色反應(yīng)依賴于蛋白中精氨酸殘基的數(shù)目，因此不
同蛋白間測(cè)定的差異可能較大。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品曲線配制時(shí)，如果吸量不準(zhǔn)確或者加樣槍不精確會(huì)造成標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系
數(shù)減小，可根據(jù)需要使用倍比梯度稀釋的方法來(lái)配制，或者使用精確度高的加
樣槍。
4. 由于 Bradford 法在蛋白濃度增高到一定時(shí)候，顏色反應(yīng)并不成比例增加，因
此得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線只是在一定范圍內(nèi)可以近似看成直線，每次應(yīng)按照實(shí)際測(cè)得
的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相對(duì)精確的蛋白濃度。