DNA磷酸化試劑盒

DNA磷酸化試劑盒及特點(diǎn) 人工合成的 PCR 引物、linker 和 adaptor 的 5′端一般都是-OH 基團(tuán)而不是-PO4 基團(tuán)（除非額外付費(fèi)要求在人工合成時(shí)加上-PO4 基團(tuán)），而任何 DNA 連接酶都不能將一個(gè) DNA 分子 5′端的-OH 基團(tuán)和另一個(gè) DNA 分子 3′端的-OH 基團(tuán)進(jìn)行連接

DNA磷酸化試劑盒及特點(diǎn) 人工合成的 PCR 引物、linker 和 adaptor 的 5′端一般都是-OH 基團(tuán)而不是-PO4 基團(tuán)（除非額外付費(fèi)要求在人工合成時(shí)加上-PO4 基團(tuán)），而任何 DNA 連接酶
都不能將一個(gè) DNA 分子 5′端的-OH 基團(tuán)和另一個(gè) DNA 分子 3′端的-OH 基團(tuán)
進(jìn)行連接，因此通過(guò)人工合成的 DNA 段和天然 DNA 之間的連接效率一般都比天
然 DNA 彼此的連接效率低（天然 DNA 4 個(gè)端口均可連接，人工合成的 DNA 跟天
然 DNA 有 2 個(gè)端口可以連接，人工合成的 DNA 之間沒(méi)有任何端口可以連接），尤
其是在平末端連接時(shí)。本公司開(kāi)發(fā)的 DNA 磷酸化產(chǎn)品能將 DNA 分子 5′端的-OH

基團(tuán)磷酸化。

DNA磷酸化試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1. 可以快速把 DNA 5′端的-OH 基團(tuán)變成-PO4 基團(tuán)，使人工合成的 DNA（包括
PCR 產(chǎn)物）跟天然 DNA 一樣有高的連接效率。
2. 既可以對(duì)單鏈 DNA 進(jìn)行磷酸化處理，也可以對(duì)雙鏈 DNA 段同時(shí)磷酸化處理。
3. 處理后的 DNA 可以直接用于連接反應(yīng)、克隆等，不需要純化。
4. 本產(chǎn)品足夠 20 次 DNA 的磷酸化實(shí)驗(yàn)。
規(guī)格及成分

成 份 編號(hào) 20 次塑料包裝
10×TPK 緩沖液 130813A 50 μL
ATP 溶液（10 mM） 130813B 100 μL
T4 多核苷酸激酶（10U/uL） 130813C 20 μL
超純水 100935 1 mL
使用手冊(cè) 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期為 6 個(gè)月。
自備試劑 引物、PCR 產(chǎn)物、DNA段
使用方法 一：雙鏈 DNA段（5’端為-OH 基團(tuán)的）的磷酸化
注意：如果是 PCR 產(chǎn)物，一定要先膠回收，不能使用沒(méi)經(jīng)過(guò)純化的 PCR 反應(yīng)液，
因?yàn)槠渲械臍埩?PCR 引物會(huì)耗掉大量的激酶，降低 PCR 產(chǎn)物的磷酸化效率。
1、在微量離心管中配制下列反應(yīng)液（20μL）：
成 分 用 量
PCR 膠回收片段 2 μL（不超過(guò) 10 pmol）
10×TPK 緩沖液 2 μL
ATP 溶液（10 mM） 5 μL
T4 多核苷酸激酶（10U/uL） 1 μL
超純水到 20 μL
2、37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3、70℃熱處理 5 分鐘，滅活酶。
4、可直接用于后續(xù)克隆（加入量不要超過(guò)總體積的 1/5）。
二：?jiǎn)捂?DNA段的磷酸化
注：?jiǎn)捂?DNA 包括局部雙鏈的 DNA。引物，linker，adaptor，Oligo 探針等均按
此操作處理。
5、在微量離心管中配制下列反應(yīng)液（20μL）：
成 分 用 量
單鏈 DNA段 5-10 pmol
10×TPK 緩沖液 2 μL
ATP 溶液（10 mM） 1 μL
T4 多核苷酸激酶（10U/uL） 1 μL
超純水到 20 μL
6、37℃反應(yīng) 30 分鐘。
7、70℃熱處理 5 分鐘，滅活激酶。
8、可直接用于后續(xù)克?。尤肓坎灰^(guò)總體積的 1/5）。如果使用濃度高，則可
能需要乙醇沉淀法濃縮 DNA。如果單鏈 DNA 的濃度低于 5pmol，還需要在乙
醇沉淀時(shí)加入核酸助沉劑。沉淀得到的 DNA 可溶解在適量的水中。
附：乙醇沉淀濃度 DNA(本試劑盒不提供相關(guān)試劑，下列操作僅供參考_：
1、在 DNA 溶液中加入 0.1 倍體積的 3 M 乙酸鈉溶液（pH 5.2），
2、再加入 2.5 倍體積的無(wú)水乙醇和 4uL 核酸助沉劑。
3、混勻后 12000g 4℃離心 10 分鐘，小心棄上清。
4、加入 1mL 70%乙醇，短暫離心 3 分鐘后小心棄上清。
5、短暫離心 5 秒，吸棄殘留液體（約 30-50uL）。
6、室溫放置 2 分鐘干燥后加入適量的超純水溶解 DNA，立即使用或放-20℃長(zhǎng)期
保存。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 DNA 快遞連接試劑盒（CAT：70602）