枳實(shí)LAMP鑒定試劑盒使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品：用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

注：上述樣品建議經(jīng)過(guò)增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測(cè)。?

二、DNA提?。?/p>

可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說(shuō)明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購(gòu)上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無(wú)菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

4、其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。?

ASB8含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族8抗體

ABP1植物生長(zhǎng)激素ABP1抗體

ACTR1A肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白1抗體

AHSPα紅細(xì)胞分化相關(guān)因子抗體

ATP1血管緊張素激活蛋白1抗體

AFMAlpha清蛋白抗體

AFAP1L2AFAP1L2抗體

AHNAK神經(jīng)細(xì)胞分化相關(guān)蛋白AHNAK抗體

AJAP1粘合連接相關(guān)蛋白1抗體

ADAM13去整合素樣金屬蛋白酶13抗體

Agrin聚集蛋白抗體

AP2 alpha + beta轉(zhuǎn)錄因子AP2α+β抗體

phospho-APC 磷酸化腺瘤樣息肉抗體

phospho-APC1 磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

APC10細(xì)胞周期后期促進(jìn)蛋白亞基10抗體

APC11細(xì)胞周期后期促進(jìn)蛋白亞基11抗體

APC2腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白2抗體

phospho-APC6 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體

APLFDNA修復(fù)酶相互作用蛋白抗體

APMAP脂肪細(xì)胞膜相關(guān)蛋白抗體

APOA1BP/AI-BP載脂蛋白A1結(jié)合蛋白抗體抗體

APOBEC1載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物1抗體

APOBEC2載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物2抗體

APOBEC3B載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物3B抗體

APOBEC3C載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物3C抗體

Apolipoprotein CI/APOC1載脂蛋白C1抗體