詳細(xì)介紹
產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系玉米MON809染料法qPCR試劑盒 |
英文名稱 | Dye qPCR kit for transgenic maize mon809 |
貨號(hào) | YSP96740 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
產(chǎn)品僅用于科研不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
HINT1 組三聚體核苷結(jié)合蛋白1 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Uracil
HIRA/DGGR1 組蛋白替換精蛋白DGGR1 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Uracil
Histone H3 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Propantheline bromide
PhosphoHistone H3 (Ser10) 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Tulobuterol hydrochloride
PhosphoHistone H3 (Ser28) 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml N(Isoxazol5yl)sulphanilamide
PhosphoHistone H3 (Thr11) 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Labetalol hydrochloride
PhosphoHistone H3 (Thr3) 組蛋白H3 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Salicylamide
Histone H3 (tri methyl K36) *基組蛋白H3 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Feprazone
enterovirus71 antibody英文簡(jiǎn)稱EV71Ab原纖維蛋白1 檢測(cè)范圍:4060nmol/L160ng/ml
soluble Tolllike receptor 2英文簡(jiǎn)稱sTLR2性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 檢測(cè)范圍:4061nmol/L40ng/mL
Immunoglobulin G2a英文簡(jiǎn)稱IgG2a補(bǔ)體因子H 檢測(cè)范圍:4062nmol/L120μg/mL
Immunoglobulin G1英文簡(jiǎn)稱IgG1纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白 檢測(cè)范圍:4063nmol/L320μg/mL
Immunoglobulin G2b英文簡(jiǎn)稱IgG2bFas活的絲/蘇激酶 檢測(cè)范圍:4064nmol/L160μg/mL
phospho glycogen synthase kinase 3β英文簡(jiǎn)稱PGSK3β脆性組三聯(lián)體 檢測(cè)范圍:4065nmol/L480pmol/L
Nodlike receptor9英文簡(jiǎn)稱NLR纖維母細(xì)胞表面蛋白 檢測(cè)范圍:4066nmol/L1000pg/mL
cyclic citrullinated peptide antibody英文簡(jiǎn)稱CCPAb卵泡抑素 檢測(cè)范圍:4067nmol/L120U/mL
thymosin b4英文簡(jiǎn)稱thymosin b4叉頭蛋白J1 檢測(cè)范圍:4068nmol/L1200pg/mL
thymosin b10英文簡(jiǎn)稱thymosin b10腦型脂肪結(jié)合蛋白 檢測(cè)范圍:4069nmol/L2000pg/mL
prothymosinα英文簡(jiǎn)稱PTMα成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10 檢測(cè)范圍:4070nmol/L2000ng/mL
rheumatoid factor IgM英文簡(jiǎn)稱RF IgM促卵泡刺激素受體 檢測(cè)范圍:4071nmol/L24mg/L
rheumatoid factor IgG英文簡(jiǎn)稱RF IgG范可尼貧血相關(guān)蛋白F 檢測(cè)范圍:4072nmol/L2400ng/mL
rheumatoid factor IgA英文簡(jiǎn)稱RF IgA凝血因子5 檢測(cè)范圍:4073nmol/L480ng/mL
AFB1 albumin英文簡(jiǎn)稱AFB1AFas相關(guān)1因子 檢測(cè)范圍:4074nmol/L400pg/ml
轉(zhuǎn)基因品系玉米MON809染料法qPCR試劑盒磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體 英文縮寫:EEF1G
電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白α抗體 英文縮寫:EEF2
前列腺素E受體蛋白4抗體 英文縮寫:EEF2k
風(fēng)疹病毒糖蛋白抗體 英文縮寫:EF-CBP2
EFR3A蛋白抗體 英文縮寫:EFEMP2
ENAH蛋白抗體 英文縮寫:EFHA1
乙基丙二酸腦病蛋白抗體 英文縮寫:EFHC1
轉(zhuǎn)錄因子E2F-3抗體 英文縮寫:EFHC2
轉(zhuǎn)錄因子E2F-5抗體 英文縮寫:EFHD1
DNA切除修復(fù)蛋白1抗體 英文縮寫:EFR3A
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。