產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊(cè)

當(dāng)前位置:
上海研生實(shí)業(yè)有限公司>技術(shù)文章>原代細(xì)胞被支原體污染導(dǎo)致什么問(wèn)題?

技術(shù)文章

原代細(xì)胞被支原體污染導(dǎo)致什么問(wèn)題?

閱讀:1025          發(fā)布時(shí)間:2018-7-12

原代細(xì)胞的培養(yǎng),支原體污染是個(gè)世界性的問(wèn)題。支原體污染幾乎可以改變細(xì)胞的所有參數(shù),導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確、甚至*錯(cuò)誤。從2013年開(kāi)始,《Nature》期刊已正式要求投稿的文章,如涉及細(xì)胞培養(yǎng)都要進(jìn)行支原體檢測(cè)。相信會(huì)有越來(lái)越多的高水平期刊將做出同樣的支原體檢測(cè)要求。

支原體通過(guò)產(chǎn)生代謝產(chǎn)物及消耗各種養(yǎng)分,如核酸前體及必需氨基酸,從而改變細(xì)胞的代謝狀態(tài)。支原體可以酵解糖,分解精氨酸,氧化丙酮酸,解脲支原體可以利用尿素作為能源,這會(huì)使細(xì)胞代謝發(fā)生一系列改變,從而影響蛋白質(zhì)、DAN、RNA合成以及嘌呤從頭合成及補(bǔ)償合成途徑。污染時(shí)間的長(zhǎng)短及核酸代謝改變決定了支原體污染造成的危害程度,導(dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、重排、非整倍體的出現(xiàn)。隨后,細(xì)胞的生長(zhǎng)特性發(fā)生改變,使某些酶和細(xì)胞因子的產(chǎn)生增加,并表現(xiàn)出一些特殊的細(xì)胞功能,而其它一些細(xì)胞正常的功能則被抑制。某些支原體附著在細(xì)胞表面后,會(huì)與宿主細(xì)胞交換膜抗原成分。隨著細(xì)胞膜成分的改變,細(xì)胞的形態(tài)及抗原性發(fā)生改變。細(xì)胞污染對(duì)研究工作帶來(lái)的zui大危害是由于錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果導(dǎo)致研究誤入歧途。此外,支原體污染還會(huì)干擾細(xì)胞的篩選,如雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制并喪失產(chǎn)生單抗的能力。

培養(yǎng)法是zui可靠的支原體檢測(cè)技術(shù),但是該方法非常耗時(shí)的,需要數(shù)周,不適合作為細(xì)胞培養(yǎng)液中支原體污染的快速檢測(cè)。有的實(shí)驗(yàn)室使用熒光染色法檢測(cè)支原體,但是該方法靈敏度太低,當(dāng)檢測(cè)成陽(yáng)性時(shí),細(xì)胞經(jīng)常已經(jīng)嚴(yán)重污染。目前,細(xì)胞培養(yǎng)液中支原體污染的檢測(cè)通常使用的是PCR法。

可以說(shuō),到目前為止,針對(duì)體外細(xì)胞培養(yǎng)的支原體檢測(cè)的方法還沒(méi)有一種單獨(dú)使用就可以保證100%正確,既不會(huì)漏檢(假陰性),也不會(huì)多檢(假陽(yáng)性)。

(1)支原體固體培養(yǎng)法。通過(guò)固體培養(yǎng)法無(wú)法檢測(cè)污染細(xì)胞的一種zui常見(jiàn)的支原體,即豬鼻支原體(M.Hyorhinis)。這是因?yàn)樨i鼻支原體無(wú)法在支原體固體培養(yǎng)基上形成可見(jiàn)的菌落,而豬鼻支原體約占所有支原體污染的20-50%。這就意味支原體固體培養(yǎng)法漏檢率高達(dá)20-50%。

(2)PCR法。PCR法導(dǎo)致的假陽(yáng)性大家比較熟悉,無(wú)需多說(shuō)。值得注意的是,由于細(xì)胞培養(yǎng)液中,經(jīng)常會(huì)含有強(qiáng)烈抑制PCR擴(kuò)增的代謝產(chǎn)物,如果不進(jìn)行樣品的前處理而直接使用細(xì)胞培養(yǎng)原液進(jìn)行PCR檢測(cè),產(chǎn)生假陰性的概率是非常大的。

(3)熒光染色法。由于該方法本身的靈敏度較低,輕度的支原體污染往往無(wú)法檢測(cè)出來(lái)。該方法漏檢率也不會(huì)低。

(4)各種宣稱檢測(cè)支原體特異性酶的方法,我們對(duì)此持謹(jǐn)慎態(tài)度。比如Lonza公司的依據(jù)支原體特異性酶而設(shè)計(jì)的支原體檢測(cè)試劑盒,其說(shuō)明書(shū)就明確寫明:其結(jié)果會(huì)受到原代細(xì)胞本身的干擾,其檢測(cè)過(guò)程必須離心去除哺乳動(dòng)物細(xì)胞。這就是悖論:該支原體檢測(cè)試劑盒不是宣稱根據(jù)支原體特異性酶而設(shè)計(jì)的嗎?怎么會(huì)被哺乳動(dòng)物細(xì)胞本身干擾呢?如果會(huì)被哺乳動(dòng)物細(xì)胞本身干擾,那豈不說(shuō)明哺乳動(dòng)物細(xì)胞本身也含有該酶?如此,假陽(yáng)性豈能避免?由于類似的支原體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)都沒(méi)有公布具體的支原體特異性酶的名稱,其是否會(huì)被哺乳動(dòng)物或普通的細(xì)菌、真菌干擾而產(chǎn)生假陽(yáng)性,我們對(duì)此持高度謹(jǐn)慎態(tài)度。希望進(jìn)行細(xì)胞支原體污染檢測(cè)的具體人員自己好好研究鑒別一下。再者,其靈敏度如何也需要比較后才知道。

 Phospho-IRAK1 (Ser376) 泛素蛋白連接酶抗體

 Phospho-IRAK1 (Thr209) 泛素蛋白抗體

 Phospho-IRAK1 (Thr387) 翻譯延伸因子EF-1a抗體

 phospho-IRAK4 (Thr345) 翻譯控制腫瘤蛋白抗體

 Phospho-IRF3 (Ser396) 發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子-5抗體

 Phospho-IRF7 (Ser471/472) 發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體

 phospho-IRS1(Ser1101) 發(fā)動(dòng)蛋白樣相關(guān)蛋白1抗體

 phospho-IRS1(Ser302) 二脂酰甘油?;D(zhuǎn)移酶抗體

 phospho-IRS1(Ser307) 二甲基化組蛋白H3抗體

 phospho-IRS1(Ser332/336) 二甲基化組蛋白H3抗體
原代細(xì)胞

收藏該商鋪

請(qǐng) 登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
產(chǎn)品對(duì)比 產(chǎn)品對(duì)比 聯(lián)系電話 二維碼 意見(jiàn)反饋 在線交流

掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪
021-59989018
在線留言