人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞；C918培養(yǎng)

細胞名稱  人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞；C918培養(yǎng)
形態(tài)特性 多角

品牌 貼壁生長

特征特性 STR檢測發(fā)現三株人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞C918、M619和Mum-2B為同一遺傳背景，懷疑存在交叉污染。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；20mM Hepes

傳代方法 1：

3傳代；2~3天1次。  

傳代情況

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測 培養(yǎng)法（-）　

STR Amelogenin：X；CSF1PO：10，11；D13S317：11；D16S539：8，12；D18S51：15；D19S433：13，14；D21S11：30；D2S1338：24，25；D3S1358：16；D5S818：11，12；D7S820：12；D8S1179：13；FGA：20，21；TH01：8，9.3；TPOX：11；vWA：16，17；

同工酶

染色體

使用權限 A類

人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞；C918培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據經驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續(xù)計數10d，繪制細胞生長曲線
Rabbit Anti-human Fibrinogen/HRP 辣根過氧化物酶標記可溶性纖維蛋白原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

CBX5(Chromobox Homolog 5) CBX5(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Park7/DJ-1/CAP1抗體 Anti-CAP1/Park7/DJ-1 0.1ml

SENP5 英文名稱： 泛素相關修飾蛋白特異性蛋白酶5抗體 0.2ml

E2 tag 英文名稱： E2 tag標簽抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-HSL (Ser865) 磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體 規(guī)格 0.1ml

CBX5(Chromobox Homolog 5) CBX5(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Trx(Human Thioredoxin) ELISA Kit 人硫氧化還原蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-HER2(Tyr1112) 磷酸化HER2受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Microsporidia protien 蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體 規(guī)格 1ml

HSL(Human hormone sensitive lipase) ELISA Kit 人激素敏感性脂肪酶 96T

RNF210 英文名稱： 環(huán)指蛋白210抗體 0.2ml

CES2 英文名稱： 羧酸酯酶2抗體 0.1ml

Anti-Phospho-HER2(Tyr1112) 磷酸化HER2受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
大鼠Slit同源物3(Slit3)ELISA試劑盒，英文名：Slit3 ELISA KiISA Kit for Human Growth hormone receptor小鼠基質金屬蛋白酶8(MMP8)ELISA試劑盒，英文名：MMP8 ELISA KiISA Kit for Human High mobility group protein HMGI-C小鼠法尼酯X受體(FXR)ELISA試劑盒，英文名：FXR ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-36 alpha小鼠白介素1受體Ⅱ(IL1R2)ELISA試劑盒，英文名：IL1R2 ELISA KiISA Kit for Human Interleukin-1 receptor type 2小鼠B-細胞激活因子(BAFF)ELISA試劑盒，英文名：BAFF ELISA KiISA Kit for Human Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1大鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒，英文名：FFA ELISA KiISA Kit for Human Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial大鼠細胞因子信號轉導抑制因子3(SOCS-3)ELISA試劑盒，英文名：SOCS-3 ELISA Kit

豚鼠白介素13(IL-13)ELISA試劑盒，英文名：IL-13 ELISA KiISA Kit for Human Melanoma antigen recognized by T-cells 1大鼠缺氧誘導因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒，英文名：HIF-1α ELISA KiISA Kit for Human Atrial natriuretic peptide receptor 1大鼠可溶性CD105(sCD105)ELISA試劑盒，英文名：sCD105 ELISA KiISA Kit for Human Oxidized low-density lipoprotein大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)ELISA試劑盒，英文名：CASP7 ELISA KiISA Kit for Human Gamma-secretase subunit PEN-2大鼠雌激素受體(ER)ELISA試劑盒，英文名：ER ELISA KiISA Kit for Human Pappalysin-1大鼠TGF-β誘導早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒，英文名：TIEG1 ELISA KiISA Kit for Human Rho-associated protein kinase 2大鼠組胺H3受體(HRH3)ELISA試劑盒，英文名：HRH3 ELISA Kit
過氧化物酶阻斷劑B 10ml 推薦用于石蠟切片,孵育10分鐘.

VHLH 英文名稱： 腦視網膜血管瘤G7蛋白抗體(逢希伯-林道氏病) 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-CaMK2 alpha (Thr305) 磷酸化鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2α抗體 規(guī)格 0.1ml

L-HDC (L-Histidine decarboxylase) L-組氨酸脫羧酶抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Dbx2 英文名稱： 大腦發(fā)育同源蛋白2抗體 0.2ml

Anti-Angiotensin II type 1A receptor 血管緊張素Ⅱ1A型受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-CD36L1/SRB1 /FITC 熒光素標記高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-PEPT1/FITC 熒光素標記腸道肽轉運蛋白1/小肽轉運蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh B7-DC/CD273/PDL2 程序性死亡配體2抗體 規(guī)格 0.1ml

Acinus peptide ACINUS 多肽抗原 0.5mg

GMRP1 英文名稱： 糖代謝相關蛋白1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-pig IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的兔抗豬IgG 規(guī)格 0.1ml

Anti-PEPT1/FITC 熒光素標記腸道肽轉運蛋白1/小肽轉運蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。