詳細(xì)介紹
轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠睪丸支持細(xì)胞;15P-1價格懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
細(xì)胞名稱 轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠睪丸支持細(xì)胞;15P-1價格
形態(tài)特性
品牌 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞源于表達(dá)PyLT的轉(zhuǎn)基因小鼠的睪丸細(xì)胞,表現(xiàn)出支持細(xì)胞的特性;具有吞噬活性,能內(nèi)化乳膠微粒,清除死細(xì)胞;表達(dá)KL蛋白;具有光譜抗菌活性,釋放蛋白酶敏感物質(zhì)。培養(yǎng)溫度32℃。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2~1:4傳代,傳代濃度不低于1×104 cells/cm2,每周2次換液。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工酶
染色體 70~84
使用權(quán)限 A類
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-Pokemon/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗蒙抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgA Whole serum 羊抗人IgA抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
凋亡抑制因子5抗體 anti-IAP-5 0.2ml
Rabbit Anti-human IgA 兔抗人免疫球蛋白A 0.2ml
FANCF 英文名稱: 范可尼貧血相關(guān)蛋白F抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-RasGRF1(Ser916) 磷酸化Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子1 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-human IgA Whole serum 羊抗人IgA抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
RTKs(Human receptor tyrosine kinase) ELISA Kit 人受體酪氨酸激酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-NPM (Thr199) 磷酸化核仁磷酸蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh IGSF2/CD101 CD101抗體 規(guī)格 0.2ml
INH-BGnRH(Mouse inhibin B) ELISA Kit 小鼠抑制素B 96T
phospho-PRKCB(Ser642) 英文名稱: 磷酸化蛋白激酶C抗體 0.1ml
CFTR 英文名稱: 囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子抗體 0.2ml
Anti-Phospho-NPM (Thr199) 磷酸化核仁磷酸蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
TIMP-4 ELISA Kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4 96T
PLCG 2 英文名稱: 磷酯酶Cγ2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Insulin 胰島素抗體 規(guī)格 0.1ml
EAR2(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 2)ELISA Kit 人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
C19orf77 英文名稱: 19號染色體開放閱讀框77抗體 0.1ml
Anti-MTF-1 金屬反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
CsA(Mouse Cyclosporine A) ELISA Kit 小鼠環(huán)孢素AMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CK18/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白18抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DNAI1/Dynein intermediate chain 1 軸絲中鏈動力蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Avidin/FITC 熒光素標(biāo)記親合素 0.1ml
Lipophilin B 英文名稱: 親脂性蛋白B抗體 0.2ml
硝基咪唑類檢測試劑盒 96孔/盒 動物組織/水產(chǎn)/蜂蜜/奶
Anti-CK18/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白18抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml