詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:人滑膜細(xì)胞試劑盒
規(guī)格:6次/盒操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Mfn1/FITC 熒光素標(biāo)記線粒體融合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-TNFAIP1/FITC 熒光素標(biāo)記壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ACE1/CD143 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶ACE1抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/PE PE標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG 0.1ml
GPR58 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體58抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Avidin/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml
Anti-TNFAIP1/FITC 熒光素標(biāo)記壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MCP-1/CCL2/MCAF ELISA KIT 大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ADK/adenylate kinase/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠腺苷酸激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FBXL20 FBXL20蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
LTE4 ELISA Kit 大鼠白三烯E4 96T
Phospho-MARCKS(Ser170) 英文名稱: 磷酸化丙酸蛋白激酶C底物Marcks抗體 0.1ml
ARTS 英文名稱: 凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體 0.2ml
Anti-ADK/adenylate kinase/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠腺苷酸激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照) 0.1ml
LRFN3 英文名稱: 神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh DDX58 DDX58抗體 規(guī)格 0.2ml
BGP/Gehrelin(Mouse brain-gut peptides) ELISA Kit 小鼠腦腸肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
土霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.1
Anti-CSP/FITC 熒光素標(biāo)記環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
人滑膜細(xì)胞試劑盒PS(Human Prednisolone) ELISA Kit 人潑尼松龍Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-M2-PK (pyruvate Kinase M2) 丙酮酸激酶-M2Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh KIF15 驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員15抗體 規(guī)格 0.2ml
DHEA-S ELISA Kit 大鼠脫氫表雄酮酯 96T
PRSS3 英文名稱: 腦胰蛋白酶3抗體 0.2ml
phospho-CDKN2A (Ser152) 英文名稱: 磷酸化抑癌基因p16抗體 0.1ml
Anti-M2-PK (pyruvate Kinase M2) 丙酮酸激酶-M2Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml