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磷脂酶D(PLD)微量法

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更新時間:2022-03-10 14:23:14瀏覽次數(shù):229

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/96樣
貨號 YS-01S6712 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 公司產(chǎn)品僅供于科研使用    
磷脂酶D(PLD)微量法公司正在熱銷的產(chǎn)品:LECT2小鼠白細胞衍生趨化因子2ELISA方法
LECT1小鼠白細胞衍生趨化因子1ELISA方法
IL24小鼠白細胞介素24ELISA檢測試劑盒
ALCAM小鼠白細胞激活黏附因子ELISA方法
LEI小鼠白細胞彈性蛋白酶抑制因子ELISA方法

詳細介紹

圖片1.png

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

磷脂酶D(PLD)微量法

100管/96樣

微量法

YS-01S6712

商品介紹:

公司產(chǎn)品僅用于科研測定意義
磷脂酶D(EC3.1.4.4)即磷脂酰膽堿水解酶,是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱,廣泛存在于高等動植物和細菌等多種生物體中,具有參與細胞脂質(zhì)代謝、信號傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。

測定原理

磷脂酶D催化水解磷脂酰膽堿末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽堿,膽堿在膽堿氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì),在500nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計、微量石英比色皿、恒溫水浴鍋,無水乙醇。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。

試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。

標準品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標準液,4℃保存。

粗酶液提取:

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,4℃、8000g離心10min,取上清液待測。

2. 細菌或細胞:按照細菌或細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定,或者適當(dāng)稀釋后測定。

測定步驟:

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到510 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。

3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。

4. 標準管:取EP管,加入4μL標準品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A標準管。

5. 對照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸餾水,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。

6. 測定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。

其中標準管和空白管只需做一管,測定管和對照管每個樣均需做。

注意:空白管和標準管只需測定一次。

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