操作程序:
由您提供該實(shí)驗(yàn)中目的基因的相關(guān)資料(如:基因名稱、序列等信息),我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線;
商定服務(wù)收費(fèi)、付款方式、服務(wù)期限等,并簽定技術(shù)服務(wù)合同。
有您提供實(shí)驗(yàn)所需的足夠量的實(shí)驗(yàn)樣本(100mg組織或107個(gè)細(xì)胞),本公司不接受您提供的RNA樣本
PCR所需引物/探針(如果用探針法),可以由您自己提供,也可以委托本公司設(shè)計(jì)合成(費(fèi)用另計(jì))。如果由您自己提供,必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉,本公司不接受已溶解的引物/探針。
我們進(jìn)行RNA抽提、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄、Real-time PCR擴(kuò)增、數(shù)據(jù)分析。
提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)過程、所用儀器試劑、擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
二、稀釋 PCR 陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
吡啶 光譜級(jí), ≥99.5% (GC)三叔丁 藥用級(jí)雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)免疫試劑盒
酯 Standard for GC,≥99.5%(GC)三叔丁 98%雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒
4-(2-吡啶偶氮) AR三叔丁 分析標(biāo)準(zhǔn)品雞脂肪甘油三酯脂(ATGL)免疫試劑盒
4-(2-吡啶偶氮) 98%無水檸檬 AR, ≥99.5% (T)雞脂多糖/內(nèi)(LPS)免疫試劑盒
磷氫二,三水 SP USP級(jí)雞脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒
Standard for GC CP雞孕激/孕酮(PROG)免疫試劑盒
哌啶 Standard for GC, ≥99.5% (GC)玉米油 試劑級(jí)雞游離脂肪(FFA)免疫試劑盒
正戊酯 Standard for GC玉米油 藥用級(jí)雞抑制B(INH-B)免疫試劑盒
石油 for GC,用于環(huán)境分析尼泊金乙酯 CP,99.0% 雞抑制A(INH-A)免疫試劑盒
石油 for HPLC,bp 60-90 °C羊毛脂 藥用級(jí)雞乙酰輔A羧化α(ACACA)免疫試劑盒
溴化 光譜純SP羊毛脂 CP雞胰高血糖(GC)免疫試劑盒
聚二乙烯多孔小球GDX-101 40-60目DL-蘋果 AR,99.5%雞胰島樣生長因子2(IGF2)免疫試劑盒
聚二乙烯多孔小球GDX-101 60-80目山梨 >99.0%(T)雞胰島樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒
聚二乙烯多孔小球GDX-101 80-100目山梨 CP,98%雞胰島(INS)免疫試劑盒
聚二乙烯多孔小球GDX-102 40-60目山梨 分析標(biāo)準(zhǔn)品雞一氧化氮(NO)免疫試劑盒
玉米內(nèi)源基因核酸檢測(cè)試劑盒48T 0.2PCR管人抗內(nèi)因子抗體(IFA)ELISA試劑盒,IFA ELISA kit苊烯磷化α-連環(huán)蛋白抗體
人晶體蛋白α(Cryα)ELISA試劑盒,Cryα ELISA kit胸腺嘧啶-1-乙周期E2抗體
人類白抗原B27(HLA-B27)ELISA試劑盒,Fmoc-β-homoaspartic acid磷化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激CAMK2B/D/G抗體
人蝸牛同源物2(SNAI2)ELISA試劑盒,4-氨基-2-甲腫瘤易感候選基因3抗體
人B連接蛋白(BLNK)ELISA試劑盒,4-氨基-2-甲磷化腫瘤易感候選基因3抗體
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA試劑盒,4-氨基-2-甲磷化CREB-1抗體
小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒,3--5-羥基吡啶磷化CREB-1抗體
兔載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒,3--5-羥基吡啶磷化周期依賴性激6抗體