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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖經(jīng)CD34免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 骨髓 |
英文名稱 | Rat Bone Marrow-Derived Endothelial Progenitor Cells | 貨號(hào) | YS-01X7408 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。內(nèi)皮祖細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，亦稱為成血管細(xì)胞（Angioblast），是一群具有游走特性，能進(jìn)一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞，缺乏成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu)，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù)。研究顯示，內(nèi)皮祖細(xì)胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，EPCs生物學(xué)特性和治療作用的研究成為這一領(lǐng)域新的熱點(diǎn)。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代；不建議多次傳代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA 試劑盒
Human iggering receptor expressed on myeloid cells -1 (EM-1) ELISA Kit 人髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(EM-1)試劑盒
HumanChlamydiaachomatis,CTELISAKit 人沙眼衣原體抗體(CT)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanargininevasopressin,AVP試劑盒人精加壓素(AVP)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物源性食品花生(pean)試劑盒20次
Humahymus-leukemiaaigen,TLaELISAKit人白血病抗原(TLa)試劑盒規(guī)格：96T/48T
豚鼠壞死因子α(TNF-α)試劑盒 ，英文名： TNF-α ELISA Kit
Human protein kinase C (PKC) ELISA Kit 人蛋白激酶C(PKC)試劑盒
Monkeyα1-microglobulin,α1-MGELISAKitα1微球蛋白(α1-MG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforBMP-6ELISAKit大鼠骨形成蛋白6
細(xì)菌鎂ATP酶(Mg++-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次
Rabbitmyelinbasicprotein,MBPELISAKit兔子髓0脂堿性蛋白(MBP)試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子/CD147 英文名稱： mouse Exacellular Maix Metalloproteinase Inducer /CD147 規(guī)格： 英文縮寫： EMMPRIN/CD147
小鼠抗可提取核抗原抗體ENA抗體 英文名稱： Mouse Exactable Nuclear Aibody 規(guī)格： 英文縮寫： ENA
小鼠β內(nèi)啡肽 英文名稱： Beta-Endorphin 規(guī)格： 英文縮寫： β-EP
小鼠表皮生長(zhǎng)因子 英文名稱： epidermal growth factor-like growth factor 規(guī)格： 英文縮寫： EGF
REN重組小鼠 REN1 / Renin-1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
CD14(cluster of differentiation antigen 14 0.5mgCD14(cluster of differentiation antigen 14) CD14/內(nèi)毒素受體抗原
NAMPT重組人 PBEF / Visfatin / NAMPT 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
ACYP2 Protein Human 重組人 ACYP2 / Acylphosphatase-2 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
SERPINE1 Protein Rat 重組大鼠 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
BT-20(人癌細(xì)胞) 人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞HPASMC 原代骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml SELL Others Mouse 小鼠 SELL / CD62L / L-selectin 人細(xì)胞裂解液 NCI-H1299 羊原代肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 大鼠原代杏仁核神經(jīng)元細(xì)胞
大鼠骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖原代細(xì)胞SHP2 peptide 蛋白酪0酸酶2抗原 0.5mgSHP2 peptide 蛋白酪0酸酶2抗原
IL31 Protein Human 重組人 IL-31 / IL31 蛋白
HA重組甲型流感 H1N2 (A/swine/Guangxi/13/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein
LAYN Protein Human 重組人 Layilin / LAYN 蛋白
MAPK1重組人 ERK2 / MAPK1 / MAPK2 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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