化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的大鼠腦微血管內(nèi)皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、最后通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的大鼠腦微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠腦微血管內(nèi)皮原代細胞 | 組織來源 | 腦組織 |
英文名稱 | Rat Brain Microvascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7351 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞分離自腦組織；腦微血管內(nèi)皮細胞是血腦屏障的主要組成成分，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細胞，能夠限制可溶性物質(zhì)和細胞等從血液進入大腦，大腦微血管內(nèi)皮細胞與外周內(nèi)皮細胞相比具有一些相同特性。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在腦血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義。與外周內(nèi)皮細胞相同，大腦微血管內(nèi)皮細胞表面表達細胞粘附分子，調(diào)控白細胞進入大腦。由于微血管內(nèi)皮細胞的器官特異性，內(nèi)皮細胞通常取源于疾病研究的相關組織。其主要特征如下：①腦微血管內(nèi)皮細胞存在許多細胞間緊密連接，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗，延遲細胞旁的通量；②腦微血管內(nèi)皮細胞缺乏內(nèi)皮細胞的窗孔結(jié)構(gòu)，其液相物質(zhì)胞飲水平較低；③腦微血管內(nèi)皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，從而產(chǎn)生“兩極分化"的表現(xiàn)型。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品：
兔兒茶酚胺(CA)ELISA 試劑盒
Human ypsinogen activation peptide (TAP) ELISA Kit 人原激活肽(TAP)試劑盒
Humanmorbillivirus,MVELISAKit 人麻疹病毒(MV)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanglathione,GSH試劑盒人(GSH)試劑盒規(guī)格：96T/48T
組織單胺氧化酶B型(MAO-B)活性熒光定量試劑盒20次
Humanmorbillivirus,MVELISAKit人麻疹病毒(MV)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物血凝素/凝集素(PHA)試劑盒
Human ai calpastatin aibody (ACAST-D IV) ELISA Kit 人抗鈣蛋白酶抑素抗體(ACAST-DⅣ)試劑盒
PorcineImmunoglobulinM,IgMELISAKit 豬免疫球蛋白M(IgM)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAFP-L3(Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin3)ELISAKit人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3
血液A高效液相色譜法定量試劑盒20次
MouseThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit小鼠促甲狀腺素(TSH)試劑盒
豬(HYD)ELISAKit ELISA.
豬(NO)ELISAKit ELISA.
豬內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISAKit ELISA.
豬內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISAKit ELISA.
IL18R1重組大鼠 IL18R1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
GSK-3 Alpha (Glycogen Synthase Kinase-3 alpha 0.5mgGSK-3 Alpha (Glycogen Synthase Kinase-3 alpha) 葡萄糖合成激酶-3α抗原(多肽抗原)
CAMKV重組人 CAMKV 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
ING5 Protein Human 重組人 ING5 蛋白 (GST 標簽)
EREG Protein Mouse 重組小鼠 Epiregulin / EREG 蛋白 (Fc 標簽)
CL-0325C3H/10T1/2, Clone 8(小鼠胚胎成纖維細胞) CD97 Others Human 人 CD97 人細胞裂解液 MVK Others Human 人 MVK / Mevalonate kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 PTPN12 Others Human 小鼠原代下丘腦神經(jīng)元細胞 小鼠原代腎小球系膜細胞
大鼠腦微血管內(nèi)皮原代細胞內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)重組蛋白 Recombinant Intelectin 1 (ITLN1)
ALCAM Protein Human 重組人 ALCAM / CD166 蛋白 (His 標簽)
CPB1重組人 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白 (His 標簽) Protein
HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/UT31413II/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽)
CCL13重組人 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 標簽) Protein
化工儀器網(wǎng)