化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)原代細(xì)胞 | 組織來源 | 視網(wǎng)膜 |
英文名稱 | Rat Retinal Astrocyte Cells | 貨號(hào) | YS-01X8259 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
大鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、節(jié)細(xì)胞層、纖維層、內(nèi)界膜。星形膠質(zhì)細(xì)胞為中樞系統(tǒng)中的伙伴元提供多種支持功能，如發(fā)育過程中的引導(dǎo)、終生的營養(yǎng)和代謝支持。大量研究表明，星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞系統(tǒng)中功能多樣的細(xì)胞群之一。腦卒中和其他損傷時(shí)，正常星形膠質(zhì)細(xì)胞功能受損可嚴(yán)重影響元存活。視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)元的穩(wěn)態(tài)和視網(wǎng)膜的功能至關(guān)重要。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
大鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員1B(TNFRSF1B)試劑盒 ，英文名： TNFRSF1B ELISA Kit
Mouse granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 小鼠顆粒酶A(Gzms-A)試劑盒
MouseClusterofdiffereiation30,CD30ELISAKit 小鼠白細(xì)胞分化抗原30(CD30)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanimmunosuppressiveacidicprotein,IAPELISAKit人免疫抑制酸性蛋白
微型RNA(miRNA)目標(biāo)基因探測試劑盒5次
ELISAKitMIP-2大鼠巨噬細(xì)胞性蛋白2
小鼠受體()ELISA 試劑盒 96T/48T
Human coagulation factor XIII (F XIII) ELISA Kit 人ⅩⅢ(FⅩⅢ)試劑盒
Humananspoerassociatedwithaigenprocessing,TAPELISAKit 人抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TAP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Human2,3-dinohromboxaneB2,2,3-dinor-TXB2試劑盒人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)試劑盒規(guī)格：96T/48T
真菌/酵母細(xì)胞樣品氧化酶活性測定試劑盒20次
Mouseapoprotein,apo-A1ELISAKit小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子 -1 (mouse sICAM-1) 作用： ELISA 規(guī)格： 96T 美國 R&D
小鼠干擾素 - a (mouse IFN- a ) 作用： ELISA 規(guī)格： 72T 美國 R&D
小鼠干擾素 - g (mouse IFN- g ) 作用： ELISA 規(guī)格： 96T 法國 Diaclone
小鼠免疫球蛋白 E (mouse IgE) 作用： ELISA 規(guī)格： 96T 美國 ADI
SLPI重組人 SLPI 蛋白 Protein
SM-MHC(Cardiac myosin heavy chain 0.5mgSM-MHC(Cardiac myosin heavy chain) 心肌肌凝蛋白多肽
EPCAM重組人 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 Protein
CSF3 Protein Human 重組人 G-CSF / CSF3 蛋白 (isoform b)
NRP1 Protein Human 重組人 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
CXCL12 Others Cynomolgus 食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 人細(xì)胞裂解液 FGFRL1 Others Mouse 小鼠 FGFRL1 / FGFR5 人細(xì)胞裂解液 CL-0445Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆) 小鼠原代脾基質(zhì)細(xì)胞 大鼠原代胸腺基質(zhì)細(xì)胞
大鼠視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)原代細(xì)胞IQGAP1 支架蛋白抗原 0.5mgIQGAP1 支架蛋白抗原
DCBLD1 Protein Human 重組人 Discoidin / DCBLD1 蛋白
THY1重組食蟹猴 CD90 / THY-1 蛋白 Protein
PDPN Protein Mouse 重組小鼠 Podoplanin / PDPN 蛋白
DDOST重組人 DDOST / OST48 蛋白 Protein
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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