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詳細(xì)介紹
兔表皮角化上皮原代細(xì)胞
兔表皮角化細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角化細(xì)胞（KC）是構(gòu)成表皮的主要細(xì)胞成分，在體內(nèi)處于不斷增殖過(guò)程中，分裂的角化細(xì)胞主要位于其基底層，少數(shù)位于棘細(xì)胞層。隨著向表層的推移，細(xì)胞的分化程度逐漸增加，并喪失分裂活性。
英文名稱 | Rabbit Epidermal keratinized epithelial Cells | 組織來(lái)源 | 皮膚 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8321 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔表皮角化上皮細(xì)胞
組織來(lái)源：皮膚
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-3代左右；2代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔表皮角化上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔表皮角化上皮細(xì)胞先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔表皮角化上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞MA | Nm23-H2： 抑制基因抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh MCG10 RNA相關(guān)結(jié)合蛋白MCG10抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-tsg101/FITC 熒光素標(biāo)記tsg101抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
SSTR2 (somatostatin receptor 2) 受體2抗原 0.5mg | Anti-oxytocin receptor 催產(chǎn)素受體(受體)抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Anti-Galectin-3/FITC 熒光素標(biāo)記半乳糖凝集素-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC25A10 線粒體二羧酸載體蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-phospho-JNK1/2(pThr183/pTyr185)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化氨基末端激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Anti-ATR/ACTR(phospho Ser428) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠0酸化ATR抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
TNFRSF13C Others Rat 大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基2型(即用型) 500ml |
人角膜細(xì)胞HK | IFNGR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNGR / IFNGR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
NCI-H157(人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SRSV/3T3(SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細(xì)胞) | EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928 人前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | CD276 Others Rat 大鼠 B7-H3 / CD276 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
MesenFectagen? 間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 | 兔表皮角化上皮原代細(xì)胞Anti-oxytocin receptor 催產(chǎn)素受體(受體)抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
SEMA3A Others Mouse 小鼠 Semaphorin 3A / SEMA3A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | EFNB2 Protein Human 重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 |
臍帶單核細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人系統(tǒng)周邊細(xì)胞 (HPNC)( 5×105 ) 小鼠海馬膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) Mouse |
CRFK貓腎細(xì)胞 CRFK feline kidney cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | GIMAP6： GTP酶IMAP家族成員6抗體 0.2ml |
Human Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit 球蛋白GMulti-class antibodies規(guī)格： 48T | SERPINB6B Others Mouse 小鼠 Serpinb6b 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
細(xì)胞毒性受體NK-p44抗體 Anti-CD336/NKp44/NCR2 0.1ml | HEV-IgG(Human hepatitis E virus IgG) ELISA Kit 人戊型肝炎病毒IgG 96T |
ASF1A： 細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體 0.1ml | TNFRSF13C Others Rat 大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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