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詳細(xì)介紹
兔大隱靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞
兔大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內(nèi)側(cè)端，經(jīng)內(nèi)踝前方，沿小腿內(nèi)側(cè)緣伴隱上行，經(jīng)股骨內(nèi)側(cè)髁后方，進(jìn)入大腿內(nèi)側(cè)部，與股內(nèi)側(cè)皮伴行，逐漸向前上，在恥骨結(jié)節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點稱為隱股點。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內(nèi)側(cè)淺靜脈和股外側(cè)淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結(jié)扎時，須分別結(jié)扎、切斷各屬支，以防復(fù)發(fā)。大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞對維持大隱靜脈動態(tài)平衡起著重要作用。它們合成、分泌凝血和纖溶系統(tǒng)的激活因子和抑制因子、影響血小板粘附和聚集的調(diào)節(jié)因子；大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞還釋放控制細(xì)胞增殖和調(diào)節(jié)血管壁緊張度的分子。
英文名稱 | Rabbit Great Saphenous Vein Endothelial Cells | 組織來源 | 大隱靜脈 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8335 |
細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
組織來源：大隱靜脈
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔大隱靜脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔大隱靜脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤;M5076 | GR ELISA Kit 大鼠糖皮質(zhì)類固醇受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
phospho-Caseine Kinase 1 alpha(Tyr294)： 0酸化酪蛋白激酶casein kinase Iα抗體 0.1ml | GABARAP： γ-基受體相關(guān)蛋白抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CEA(C3) 癌胚抗原單克隆抗體(包被) 規(guī)格 0.1ml | PLEKHM2： 血小板白細(xì)胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M2抗體 0.2ml |
Anti-NQO1/FITC 熒光素標(biāo)記醌氧化還原酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | phospho-FAK(pTyr577) 0酸化粘著斑激酶抗原 0.5mg |
IgM/Gold 金標(biāo)記兔抗IgM (10或15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml | 2-Mar： 膜相關(guān)環(huán)指蛋白2抗體 0.2ml |
NRG1 Others Canine 狗 NRG1-alpha (EGF Domain) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人間充質(zhì)干細(xì)胞-骨髓總RNAHMSC-bm NA | PARP1 Others Mouse 小鼠 PARP-1 / PARP 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
FGF9 Others Human 人 FGF9 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | PROCR Others Mouse 小鼠 Epcr / PROCR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
Promocell C-28020 Hematopoietic ProgenitorMedium, 造血祖細(xì)胞培養(yǎng)基(即用型) 100ml | 牛源細(xì)胞 肝癌細(xì)胞，HCCLM3細(xì)胞 C3細(xì)胞，小鼠白血病細(xì)胞 |
KM小鼠子瘤株;U14 | 兔大隱靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞PLEKHM2： 血小板白細(xì)胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M2抗體 0.2ml |
斑馬魚尾鰭細(xì)胞;AB.9 人肝癌細(xì)胞，SNU-182細(xì)胞 HEp-2(喉表皮樣癌細(xì)胞) | 人結(jié)膜成纖維細(xì)胞cDNAHConF cDNA |
PIEC 豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞 | COLEC12 Others Cynomolgus 食蟹猴 CLP1 / COLEC12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CSH1 Others Human 人 CSH1 / Lactogen 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Anti-IL-17/PE 熒光素PE標(biāo)記白介素-17抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-Runx3 Runx3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | CM-R027大鼠食管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
Rhesus antibody Rh phospho-PLB(Ser16) 0酸化心臟0蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus) 基爾曼氏細(xì)小病毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在病毒KRV)C端 規(guī)格 1ml |
bFGF (Rabbit basic fibroblast growth factor) ELISA Kit 兔子堿性成纖維細(xì)胞生長因子 96T | NRG1 Others Canine 狗 NRG1-alpha (EGF Domain) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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