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兔肺大動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞
兔肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自肺大動(dòng)脈組織；肺大動(dòng)脈亦稱肺動(dòng)脈干。在呼吸空氣的脊椎動(dòng)物中，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動(dòng)脈。肺大動(dòng)脈起于右心室，在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行，在主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈，經(jīng)肺門入肺。肺動(dòng)脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動(dòng)脈干。起自右心室，在升主動(dòng)脈前方向左后上方斜行，至主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈。左肺動(dòng)脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進(jìn)入左肺上、下葉。右肺動(dòng)脈較長而粗，經(jīng)升主動(dòng)脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進(jìn)入右肺上、中、下葉。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞是肺血管的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在調(diào)控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的異常是肺動(dòng)脈高壓發(fā)生發(fā)展的重要病理學(xué)特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關(guān)鍵。研究表明，急性和慢性缺氧均可導(dǎo)致肺動(dòng)脈高壓，即缺氧性肺動(dòng)脈高壓，推斷缺氧可能是通過促進(jìn)肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖而參與缺氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生發(fā)展。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞主要功能：①細(xì)胞表面表達(dá)介質(zhì)(ICAM-1和VCAM-1)參與血管壁炎癥反應(yīng)；②是多數(shù)重要?jiǎng)用}疾病的靶細(xì)胞。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動(dòng)脈高壓；②先天性肺動(dòng)脈狹窄；③肺動(dòng)脈栓塞。
英文名稱 | Rabbit Pulmonary Aorta Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 肺動(dòng)脈組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7043 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
組織來源：肺動(dòng)脈組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
方法簡介
普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大動(dòng)脈平滑肌采用 - 膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞;DCS | LHRH ELISA Kit 大鼠黃體生成素釋放激素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
Caseine Kinase 1 alpha： 酪蛋白激酶casein kinase Iα抗體 0.2ml | GABARE： G基受體ε/GABAA Rε抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh CEA(B5) 癌胚抗原單克隆抗體(檢測(cè)) 規(guī)格 0.1ml | PLEKHM1： 石骨癥相關(guān)蛋白PLEKHM1抗體 0.2ml |
Anti-NR1/NMDAR1/FITC 熒光素標(biāo)記谷受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | FAK(Focaladhesin kinase) 粘著斑激酶抗原 0.5mg |
TG/Gold 金標(biāo)記兔抗甲狀腺球蛋白 (10或15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml | 1-Mar： 膜相關(guān)環(huán)指蛋白1抗體 0.2ml |
CD300LG Others Human 人 CLM-9 / EM4 / CD300LG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | TF-1(人血液白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠腦瘤細(xì)胞;BC3H1 |
人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝臟裂解物HMSC-hp L | AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | SERPINB8 Others Mouse 小鼠 SerpinB8 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
NCR2 Others Human 人 NKp44 / NCR2 / CD336 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | A2780/Taxol細(xì)胞，人卵巢癌耐藥株 鼠腹水單核細(xì)胞瘤,J774A.1細(xì)胞 前列腺癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml |
KM3, 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 | 兔肺大動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞PLEKHM1： 石骨癥相關(guān)蛋白PLEKHM1抗體 0.2ml |
Bowes Melanoma細(xì)胞，黑色素瘤細(xì)胞 人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞,AL7P/HL-60R細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29 | 人結(jié)膜成纖維細(xì)胞總RNAHConF NA |
正常小鼠Leydig細(xì)胞;TM3 | IFNA13 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNA13 / Ierferon alpha-13 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
IL18BP Others Mouse 小鼠 IL18BP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | Anti-IL-17R/IL-17RA/CD217/FITC 熒光素標(biāo)記白介素17受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Anti-S6PDH 6-0酸山脫氫酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 1ml | Ha Fe細(xì)胞，羊膜細(xì)胞 人高分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞系,THC-8307細(xì)胞 CM-R045大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
Rhesus antibody Rh phospho-PPM1A(Ser375) 0酸化蛋酸酶2C亞型α抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh KIFC1 驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員C1抗體 規(guī)格 0.2ml |
ChAT (Rat Choline Acetyltransferase ) ELISA Kit 大鼠乙酰轉(zhuǎn)移酶 96T | CD300LG Others Human 人 CLM-9 / EM4 / CD300LG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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