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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大靜脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大靜脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔肺大靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 肺靜脈組織 |
英文名稱 | Rabbit Pulmonary Great Vein Endothelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7183 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺大靜脈組織；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動(dòng)物中，把動(dòng)脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個(gè)靜脈里流動(dòng)脈血的血管。左右1對(duì)，共4條，兩條連接右肺，兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動(dòng)脈高壓，是由于肺靜脈內(nèi)血液淤滯而引起的肺動(dòng)脈高壓。正常情況下，肺循環(huán)具有血壓低、阻力小和順應(yīng)性大的特點(diǎn)，肺動(dòng)脈壓力高低取決于單位時(shí)間內(nèi)肺動(dòng)脈血流量和肺血管的阻力，要維持肺循環(huán)的低壓、低阻的狀態(tài)，必須保證整個(gè)肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻，血液順利地由肺動(dòng)脈經(jīng)毛細(xì)血管進(jìn)入肺靜脈，再入左心室，經(jīng)過左心室收縮進(jìn)入體循環(huán)，才能避免肺動(dòng)脈內(nèi)壓力升高。細(xì)胞呈多邊形鵝卵石狀排列；該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
TG-905細(xì)胞，人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 熒光假單胞菌 人滋養(yǎng)層絨毛細(xì)胞總RNAHVT NA | Rhesus antibody Rh GDNF 膠質(zhì)細(xì)胞源性營(yíng)養(yǎng)因子抗體 規(guī)格 0.1ml |
Cpn-Ab(Human Chlamydia pneumoniae antibody) ELISA Kit 人肺炎衣原體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/APC APC標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.1ml |
ICAM-2： 細(xì)胞間粘附分子-2抗體 0.2ml | ICAM-2/CD102 ELISA Kit 大鼠細(xì)胞間粘附分子2 96T |
Rhesus antibody Rh Resistin 抵抗素抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-Phospho-p90RSK (Thr573)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化絲/蘇激酶p90RSK蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-Syk (Tyr525/526) 0酸化非受體型酪蛋白激酶抗體 規(guī)格 0.1ml | CDT ELISA Kit 大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白 96T |
RM1(大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 正常小鼠Leydig細(xì)胞;TM3 |
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL | EC109，人食管癌細(xì)胞 Human |
人胚肺二倍體細(xì)胞;HL | 中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1 |
SK-N-BE(2)人母細(xì)胞瘤細(xì)胞 SK-N-BE (2) in human neuroblastoma cell MEM 45%+/F12 45%+10% FBS | 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HLECL |
DT40細(xì)胞，雞淋巴瘤細(xì)胞 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,NCI-H446細(xì)胞 CL-0395NCI-H2227(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 兔肺大靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞ICAM-2/CD102 ELISA Kit 大鼠細(xì)胞間粘附分子2 96T |
CL-0245Y1(Y-1) (小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | BC-022(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11 |
PROCR Others Cynomolgus 食蟹猴 Epcr / PROCR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CM-H089人髂動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-4B3 | Rhesus antibody Rh Apelin receptor/AGTRL1 血管緊縮素樣蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-BAD(Ser91)： 0酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 0.1ml | SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7 |
Anti-PTP-1B/FITC 熒光素標(biāo)記PTP-1B蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PSMD8： 蛋白酶調(diào)解因子8抗體 0.2ml |
Anti-Jagged1/CD339 /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠Jagged1/CD339抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | RM1(大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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