化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺小動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺小動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔肺小動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 肺小動(dòng)脈 |
英文名稱 | Rabbit Pulmonary Arteriolar Endothelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X8342 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺小動(dòng)脈組織；肺動(dòng)脈干是短而粗的動(dòng)脈，自右心室的動(dòng)脈圓錐起始，向左后上方斜升，先在升主動(dòng)脈根部的前面，繼而至其左側(cè)，至主動(dòng)脈弓的下方，約在第5胸椎高度，分為左、右肺動(dòng)脈。左肺動(dòng)脈較短，橫行向左，經(jīng)左主支氣管前方至左肺門，分兩支進(jìn)入左肺的上、下葉。右肺動(dòng)脈較長(zhǎng)，橫行向右，經(jīng)主動(dòng)脈升部和上腔靜脈的后方達(dá)右肺門，分3支進(jìn)入右肺上、中、下葉。左、右肺動(dòng)脈的各分支在肺實(shí)質(zhì)內(nèi)又反復(fù)分支，與支氣管的分支伴行，后達(dá)肺泡壁，形成稠密的毛細(xì)血管網(wǎng)。肺動(dòng)脈輸送的是含二氧化碳較多的靜脈血。在肺動(dòng)脈干分叉處稍左側(cè)與主動(dòng)脈弓下緣之間有一結(jié)締組織索，稱動(dòng)脈韌帶。管徑在0.3-1mm之間，為小動(dòng)脈（small-artery），小動(dòng)脈包括粗細(xì)不等的幾級(jí)分支，也屬肌性動(dòng)脈。較大的小動(dòng)脈，內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近，一般沒(méi)有外彈性膜。口徑在1mm以下的動(dòng)脈，管壁有完整的平滑肌層及少量的彈性纖維和膠質(zhì)纖維。小動(dòng)脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素，也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開(kāi)關(guān)"。典型的小動(dòng)脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2。中膜的肌層相對(duì)比其他動(dòng)脈為厚，當(dāng)平滑肌在支配下強(qiáng)力收縮時(shí)，其管腔可以閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細(xì)血管內(nèi)，從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力。如果有許多小動(dòng)脈同時(shí)收縮，可使血壓顯著上升。反之，當(dāng)小動(dòng)脈的平滑肌舒張時(shí)，則可使大量的血液流入毛細(xì)血管，外周阻力明顯下降，血壓降低。終末小動(dòng)脈(terminal arteri-ole)的口徑為20-30μm；后小動(dòng)脈(metar-teriole)，又稱毛細(xì)血管前小動(dòng)脈(precapil-lary arteriole)的口徑為12-15μm。管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌，在毛細(xì)血管前小動(dòng)脈分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細(xì)血管前括約肌(precapillary sphinc-ter)，其收縮或舒張，可調(diào)節(jié)真毛細(xì)血管的血流量，是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開(kāi)關(guān)"。支配小動(dòng)脈平滑肌的交感纖維，可延伸到終末小動(dòng)脈和后小動(dòng)脈的平滑肌細(xì)胞。在毛細(xì)血管前括約肌上交感纖維特別豐富。肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層多角形鋪路石狀分布，該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡、合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔肺小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
KYSE 450細(xì)胞，人食管鱗癌 膠質(zhì)瘤細(xì)胞,CRT細(xì)胞 家兔腎細(xì)胞;RABK3 | Col IV (Mouse Collagen Type IV ) ELISA KIT 小鼠Ⅳ型膠原 96T |
Reprimo： 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的糖基化蛋白抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh PTPN4/MEG1 蛋白酪0酸酶非受體型4抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-Phospho-HER2(Tyr1221/1222)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化HER2受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CCDC54： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白54抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BPGM 紅細(xì)胞2,3 - 二0酸甘油酸合成酶抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-CXCL14/FITC 熒光素標(biāo)記CXC趨化因子14抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子-7抗體 Anti- KGF/FGF-7 0.1ml | ARP2/3 subunit 1B： 肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合亞單位B1抗體 0.1ml |
CCL-149(大鼠肺泡上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1 |
BEL-7402細(xì)胞，肝癌細(xì)胞 人口腔表皮樣癌細(xì)胞,KB細(xì)胞 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A2 | C57BL/6小鼠T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞;RMA |
人細(xì)胞;Hela | A875(人黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
CM-M005小鼠氣管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | CL-0119HuH-6(人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
HEK-293細(xì)胞，Ad5DNA轉(zhuǎn)化的胚腎細(xì)胞 恒河猴胚腎細(xì)胞,FRhK-4細(xì)胞 CL-0251MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 兔肺小動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞CCDC54： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白54抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO | SAC-II B2細(xì)胞，小鼠腹水瘤細(xì)胞 BRL 3A(大鼠肝細(xì)胞) 人皮膚成纖維細(xì)胞;CCC-HSF-1 |
SCARB2 Others Human 人 SCARB2 / LIMP2 / CD36L2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | 牛腎細(xì)胞;MDBK(BVDV-free) |
人胚肺成纖維細(xì)胞;HFL1 | IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GRK5 G蛋白偶聯(lián)受體激酶5抗體 規(guī)格 0.2ml | 人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HVT |
EMAP2： 內(nèi)皮單核細(xì)胞激活肽2抗體 0.2ml | Anti-Phospho-Lyn (Tyr507) 膜相關(guān)蛋白酪激酶Lyn抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
NF-κB p65(Mouse nuclear factor-κB p65) ELISA Kit 小鼠核因子κB亞基p65親和肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | CCL-149(大鼠肺泡上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)