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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔骨髓基質(zhì)采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔骨髓基質(zhì)經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔骨髓基質(zhì)原代細(xì)胞 | 組織來源 | 骨髓 |
英文名稱 | Rabbit Bone Marrow Stromal Cells | 貨號 | YS-01X8356 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓基質(zhì)細(xì)胞是一類具有多向分化潛能的干細(xì)胞，其中部分細(xì)胞有自我復(fù)制、高度增殖和多向分化能力，在特定培養(yǎng)條件下可向骨、軟骨、膠質(zhì)細(xì)胞、心肌、骨胳肌、脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等間葉組織細(xì)胞轉(zhuǎn)化。骨髓基質(zhì)細(xì)胞在自然條件下主要分化為成骨細(xì)胞，在不同的培養(yǎng)條件下其分化途徑不同，其在成骨細(xì)胞與成脂細(xì)胞分化之間呈反向變化。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF | Anti-Phospho-Tyk2 (Tyr1054/1055) 0酸化非受體酪蛋白激酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
COX-2(Human cyclooxygenase-2) ELISA Kit 人環(huán)加氧酶2 96T | Anti-HAS/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人血清白蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Thrap3/TRAP150 甲狀腺激素受體相關(guān)蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml | GTE-AGE(Human Glomerular tissue extract-advanced glycosylation end products) ELISA Kit 人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
FKBP52： 熱休克蛋白56抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Caspr2 軸突相關(guān)CNTP2蛋白抗體(少突膠質(zhì)細(xì)胞) 規(guī)格 0.2ml |
FOXF2： 叉頭蛋白F2抗體 0.2ml | T ELISA Kit 大鼠睪酮Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MARK3 Others Human 人 MARK3 / CTAK1 / EMK-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | A3(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 子宮癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml |
人滑膜細(xì)胞cDNAHS cDNA | TNFRSF11A Others Rat 大鼠 TNFRSF11A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
GRN Others Human 人 Granulin / GRN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CD40LG Others Cynomolgus 食蟹猴 CD40L / CD154 / TNFSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
GDF15 Others Human 人 GDF-15 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TFPI Others Mouse 小鼠 TFPI / LACI / EPI 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
GC-1, 鼠精原細(xì)胞 | 兔骨髓基質(zhì)原代細(xì)胞GTE-AGE(Human Glomerular tissue extract-advanced glycosylation end products) ELISA Kit 人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
COL2A1 Others Human 人 COL2A1 (aa 1242-1487) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | RN-s, 大鼠紋狀體元 |
HUM, 正常人主動脈平滑肌細(xì)胞 | Beta-TC-6細(xì)胞，小鼠胰腺癌beta細(xì)胞 人癌細(xì)胞,SKBr-2HL細(xì)胞 小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞MA-h |
CDK4 Others Human 人 CDK4 / CMM3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Anti-RAMP-1/FITC 熒光素標(biāo)記受體活性調(diào)制蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OPG： 骨保護(hù)蛋白/護(hù)骨素抗體 0.1ml | 人類成纖維細(xì)胞系;CNLMG-B5537SKIN 人肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Sorcin： 抗藥蛋白抗體 0.2ml | phospho-CREB-1(Ser129)： 0酸化CREB-1抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml | MARK3 Others Human 人 MARK3 / CTAK1 / EMK-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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