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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔冠狀動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的兔冠狀動脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 兔冠狀動脈平滑肌原代細胞 | 組織來源 | 冠狀動脈 |
英文名稱 | Rabbit Coronary Artery Smooth Muscle Cells | 貨號 | YS-01X8125 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔冠狀動脈平滑肌細胞分離自冠狀動脈組織；冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動脈的分布分為三型：右優(yōu)勢型、均衡型、左優(yōu)勢型。左右冠狀動脈是升主動脈的第一對分支。左冠狀動脈為一短干，發(fā)自左主動脈竇，經肺動脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合。它是構成冠狀動脈壁的主要細胞成分，細胞膜上分布著多種離子通道，如電壓依賴性Na+通道、多種Ca2+通道和K+通道；它們參與了靜息電位的維持與細胞膜電位的復極化、超極化，調節(jié)血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動脈粥樣硬化的發(fā)展也涉及冠狀動脈平滑肌細胞增殖、炎癥及凋亡等。因此，原代分離培養(yǎng)的冠狀動脈平滑肌細胞，對研究生理和病理狀態(tài)下離子通道及血管張力變化機制具有非常重要的作用。冠狀動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔冠狀動脈平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
小鼠胚胎成纖維細胞;BALB/C 3T3 | Anti-Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) 0酸化酪羥化酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
cPLA2(Human cytosolic phospholipase A2) ELISA Kit 人胞漿型0脂酶A2 96T | Mouse Anti-YERSINIA PESTIS Monoclonal Anti-body /FITC 熒光素標記鼠抗鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏菌莢膜抗原F1單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh THRA1 甲狀腺激素受體α1抗體 規(guī)格 0.2ml | LMP7/PSMB99Human low molecular-weight protein/proteasome beta-type subunit) ELISA Kit 人低分子質量蛋白7/β型蛋白酶體9Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HAPLN2： 透明質酸及粘蛋白2抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh caspase-9 p10 半胱胺酸蛋白酶蛋白9-p10抗體 規(guī)格 0.2ml |
FOXD2： 叉頭蛋白D2抗體 0.2ml | ASD ELISA Kit 大鼠雄Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
ORM2 Others Human 人 ORM2 人細胞裂解液 (陽性對照) | EFNA1 Others Mouse 小鼠 EFNA1 / Ephrin-A1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人紅系白血病細胞;TF-1 | 人脂肪間充質干細胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105) |
KLE(人子宮內膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 DLL1 / Delta-like 人細胞裂解液 (陽性對照) | PTN Others Mouse 小鼠 Pleioophin / PTN / HB-GAM 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
5E Others Mouse 小鼠 5E / CD73 人細胞裂解液 (陽性對照) | HBSMC Pellet 人支氣管平滑肌細胞團塊 > 1 mio.cells 人間充質干細胞-脂肪裂解物HMSC-ad L |
EB病毒轉化的絨猴淋巴細胞;B95-8 | 兔冠狀動脈平滑肌原代細胞LMP7/PSMB99Human low molecular-weight protein/proteasome beta-type subunit) ELISA Kit 人低分子質量蛋白7/β型蛋白酶體9Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
人外殼細胞(HHorSC)( 5×105 ) CSC, 小鼠心肌細胞 Mouse | CM-R018大鼠頜下腺上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞 Human | RWPE1細胞，人前列腺上皮細胞 鼬肺上皮細胞,MV-1-Lu細胞 小鼠海馬趾元MN-h |
NRBF2 Others Human 人 NRBF2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-RAR- Alpha /FITC 熒光素標記維受體-α 抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Orosomucoid 2： 類粘蛋白2抗體 0.2ml | 人胚肺細胞系;KuMA 人肝內膽管上皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
Somatostatin Receptor 2： 受體2抗體 0.1ml | phospho-CDKN2A (Ser152)： 0酸化抑癌基因p16抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG 驢抗豚鼠IgG 規(guī)格 1mg | ORM2 Others Human 人 ORM2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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