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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔甲狀腺濾泡上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔甲狀腺濾泡上皮經(jīng)TG(甲狀腺球蛋白)免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔甲狀腺濾泡上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 甲狀腺 |
英文名稱 | Rabbit Thyroid Follicular Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X8373 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
兔甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞分離自甲狀腺組織；甲狀腺是脊椎動(dòng)物非常重要的腺體，屬于內(nèi)分泌器官。在哺乳動(dòng)物身體中，它位于頸部甲狀軟骨下方，氣管兩旁。甲狀腺表面有結(jié)締組織被膜，表面結(jié)締組織深入到腺實(shí)質(zhì)，將實(shí)質(zhì)分為許多不明顯的小葉，小葉內(nèi)有很多甲狀腺濾泡和濾泡旁細(xì)胞。甲狀腺控制使用能量的速度、制造蛋白質(zhì)、調(diào)節(jié)機(jī)體對其他賀爾蒙的敏感性。甲狀腺依靠制造甲狀腺素來調(diào)整這些反應(yīng)，有T3和T4。這兩者調(diào)控代謝、生長速率還有調(diào)解其他的身體系統(tǒng)。T3和T4由碘和酪胺酸合成。甲狀腺也生產(chǎn)降鈣素，調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣的平衡。其中，甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞（也稱為濾泡細(xì)胞或主要細(xì)胞）是在甲狀腺細(xì)胞是負(fù)責(zé)生產(chǎn)和分泌甲狀腺激素，甲狀腺素（T4）和三碘甲狀腺原（T3）。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小鼠腦瘤細(xì)胞;BC3H1 | FAM134C蛋白抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體12抗體 | 酸化有絲分裂激酶B/C抗體 |
肺α/β水解酶蛋白1抗體 | 纖維母細(xì)胞表面蛋白抗體 |
膜粘連蛋白7抗體 | FAM134C蛋白抗體 |
纖維母細(xì)胞表面蛋白抗體 | 酸化有絲分裂激酶B/C抗體 |
人小膠質(zhì)細(xì)胞(HM) ( 5×105 ) | Promocell C-28050 DC Generation Medium, 樹突狀細(xì)胞生成培養(yǎng)基(即用型) 250ml |
人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs) | TNFRSF12A Others Human 人 TNFRSF12A / FN14 / TWEAKR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CLEC6A Others Mouse 小鼠 CLEC4N 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TFRC Others Cynomolgus 食蟹猴 ansferrin Receptor / TFRC / CD71 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人心室成纖維細(xì)胞 (HCFav)( 5×105 ) 293A，人胚腎上皮細(xì)胞系(腺病毒包裝級別) Human | 貂源細(xì)胞 淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞，A3細(xì)胞 3T3-swiss albino細(xì)胞，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1008 | 兔甲狀腺濾泡上皮原代細(xì)胞纖維母細(xì)胞表面蛋白抗體 |
獼猴肌肉細(xì)胞;MMm7 人結(jié)腸癌細(xì)胞，HT-29細(xì)胞 Bcap-37(癌細(xì)胞) | 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LoVo |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYF | PDHA1 Others Human 人 PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
hCD34+-CB-c pooled 臍帶血來源的人類造血祖細(xì)胞，混合來源 100000 人脊柱間充質(zhì)干細(xì)胞HVMSC | 富馬酸水合酶抗體 |
膜粘連蛋白7抗體 | HRT-S1細(xì)胞，人結(jié)腸癌細(xì)胞 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞,TE671 subline No.2細(xì)胞 小鼠源細(xì)胞 |
G蛋白偶聯(lián)受體12抗體 | 肺α/β水解酶蛋白1抗體 |
富馬酸水合酶抗體 | 人小膠質(zhì)細(xì)胞(HM) ( 5×105 ) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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