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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的兔角膜基質采用混合膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的兔角膜基質經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 兔角膜基質原代細胞 | 組織來源 | 角膜組織 |
英文名稱 | Rabbit Corneal Stromal Cells | 貨號 | YS-01X7159 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔角膜基質細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。角膜基質層是角膜的主要組成部分，占據角膜厚度的90%，由角膜基質細胞、膠原纖維和細胞外基質構成。角膜基質層缺損的修復主要由角膜基質細胞的增殖及分泌細胞外基質完成。角膜基質層具有結構規(guī)整，透明度高的特點，正常情況下角膜基質細胞分泌組成基質層的成分，維持角膜的透明度，此細胞對于角膜損傷的修復具有重要意義。角膜基質細胞，存在于角膜基質層中，在正常情況下，處于靜止狀態(tài)。但當角膜損傷時，不同上皮來源的因子及環(huán)境信號，將影響角膜基質細胞的應答反應，決定著角膜能否被修復。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
KYSR450細胞，人食管癌細胞 人XG惡性膠質瘤細胞,SF-295細胞 豬靜脈血管內皮細胞;ZYM-SVEC01 | 酸化糖原合酶激酶-3α抗體 |
酸化鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶4抗體 | 轉錄因子NAC1抗體 |
腫瘤壞死因子受體相關因子2抗體 | 酸化0酯酶Cγ1抗體 |
軸突導向受體蛋白3抗體 | 酸化糖原合酶激酶-3α抗體 |
酸化0酯酶Cγ1抗體 | 轉錄因子NAC1抗體 |
CHL(倉鼠肺細胞) 5×106cells/瓶×2 | CM-H106人內臟脂肪細胞培養(yǎng)基100mL |
MGC803-GFP細胞，綠色熒光蛋白標記人胃癌細胞 人成骨肉瘤細胞,Saos-2細胞 293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP | Eca-109(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
C57BL/6小鼠胚胎干細胞 C57BL/6 mouse embryonic stem cells | SW 1990(人胰腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
CM-R106大鼠膠質細胞培養(yǎng)基100mL | CL-0138Lec1(倉鼠卵巢細胞)5×106cells/瓶×2 |
Hp2/o細胞，人跟骨髓瘤細胞 赭曲霉 人胚肺成纖維細胞;HFL-I | 兔角膜基質原代細胞酸化0酯酶Cγ1抗體 |
非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2 | RN-s, 大鼠紋狀體元 [X464-20C]細胞 Vero(非洲綠猴腎細胞) |
Promocell C-23130 Fibroblast Growth Medium 3KIT, 成纖維細胞生長培養(yǎng)基3型套裝 500ml | L W-3A(小鼠皮下結締組織細胞) 5×106cells/瓶×2 |
人胚肺成纖維細胞;CCC-HPF-1 | 酸化原癌基因Yes相關蛋白1抗體 |
軸突導向受體蛋白3抗體 | 人少突膠質前體細胞-懸浮生長RNAHOPC-os miRNA5 μg |
酸化鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶4抗體 | 腫瘤壞死因子受體相關因子2抗體 |
酸化原癌基因Yes相關蛋白1抗體 | CHL(倉鼠肺細胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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