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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔腎皮質(zhì)上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腎皮質(zhì)上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔腎皮質(zhì)上皮原代細胞 | 組織來源 | 腎 |
英文名稱 | Rabbit Renal Cortical Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X8428 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔腎皮質(zhì)上皮細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔腎皮質(zhì)上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
IMR-32細胞，人母細胞瘤細胞 黃桿菌屬 人腦血管平滑肌細胞RNAHBCSMC miRNA5 μg | 酸化細胞內(nèi)流鉀通道蛋白Kir5.1抗體 |
酸化踝蛋白抗體 | 轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 |
腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1 | 酸化乳腺癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體 |
轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白4抗體 | 酸化細胞內(nèi)流鉀通道蛋白Kir5.1抗體 |
酸化乳腺癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體 | 轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 |
RS1(大鼠皮膚成纖維樣細胞) 5×106cells/瓶×2 | 恒河猴腎細胞;MMK3 |
Ls-174-T細胞，人結(jié)腸癌細胞 人黑色素瘤細胞,SK23細胞 人細胞;Hela | HCCC-9810(人肝內(nèi)膽管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
CL-0396NCI-H226(人肺鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2 | 人肺巨細胞癌高轉(zhuǎn)移細胞株;PG-BE1 |
SHG-44人膠質(zhì)瘤細胞 Human glioma cell line SHG-44 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | 小鼠腸靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
H9c2大鼠心肌細胞(ATCC來源) 人髓母細胞瘤，D341 Med細胞 NCI-H226 [H226](人肺癌細胞) | 兔腎皮質(zhì)上皮原代細胞酸化乳腺癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體 |
大鼠軟骨細胞培養(yǎng)基 100mL | CD80 Others Human 人 B7-1 / CD80 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人前列腺平滑肌細胞(HPSMC)(5×105) | CM-M004小鼠氣管上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
A549(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 | 酸化周期素依賴性激酶7抗體 |
轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白4抗體 | 615小鼠網(wǎng)織細胞性白血病瘤株;L615 |
酸化踝蛋白抗體 | 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1 |
酸化周期素依賴性激酶7抗體 | RS1(大鼠皮膚成纖維樣細胞) 5×106cells/瓶×2 |
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