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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔棕色前脂肪采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔棕色前脂肪經(jīng)油紅O染色檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔棕色前脂肪原代細胞 | 組織來源 | 脂肪 |
英文名稱 | Rabbit Brown Preadipocyte Cells | 貨號 | YS-01X8488 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔棕色前脂肪細胞分離自棕色脂肪組織；動物體內(nèi)存在棕色和白色兩種脂肪，白色脂肪堆積在皮下，負責儲存多余熱量；棕色脂肪負責分解引發(fā)肥胖的白色脂肪，將后者轉(zhuǎn)化成二氧化碳、水和熱量，本身不儲存熱量。棕色脂肪組織呈棕色，其特點是組織中有豐富的毛細血管，脂肪細胞內(nèi)散著許多小脂滴，線粒體大而豐富，核圓形，位于細胞中央，這種脂肪細胞也稱為多泡脂肪細胞。棕色脂肪組織在成年動物極少，新生兒及冬眠動物較多，在新生兒主要分布在肩胛間區(qū)、腋窩及頸后部等處。棕色脂肪組織僅在嬰兒時期發(fā)揮作用，它們堆積在新生兒肩胛處，幫助維持體溫。隨著年齡增長，棕色脂肪會逐漸消失。終，動物體內(nèi)只殘存少量棕色脂肪細胞，分布于頸部和鎖骨。脂肪組織在體內(nèi)含有兩種主要的細胞：一種是在胞漿內(nèi)積聚脂滴的成熟脂肪細胞；另一種是雖未在胞漿內(nèi)積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細胞。前脂肪細胞呈梭形，有分裂和增殖的能力；成熟的脂肪細胞呈圓形，已經(jīng)失去了分裂及增殖的能力。由于前脂肪細胞是一類具有增殖和向脂肪細胞分化能力的特異化前體細胞，與肥胖有著非常密切的關(guān)系。前脂肪細胞是一種類成纖維細胞，在演變的過程中不斷吸收脂質(zhì)，終成為成熟的脂肪細胞。前脂肪細胞對外界機械損傷的抵抗力較強，可望成為軟組織缺損的有益填充物。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔棕色前脂肪細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
兔主動脈平滑肌細胞;SMC | 干擾素β抗體 |
酸二酯酶7B抗體 | 干細胞生長因子受體/細胞表面分化抗原抗體 |
4號染色體開放閱讀框43抗體 | 巨噬細胞移動抑制因子抗體 |
過敏毒素C3受體/補體C3受體抗體 | 肌營養(yǎng)不良蛋白抗體 |
1號染色體開放閱讀框84抗體 | 同源盒蛋白H6亞型2抗體 |
IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) | TNFRSF17 Others Mouse 小鼠 BCMA / TNFRSF17 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人導管癌細胞;ZR-75-1 | CTSD Others Human 人 Cathepsin D / CTSD 人細胞裂解液 (陽性對照) |
IgG1 Others Mouse 小鼠 IgG1-Fc 人細胞裂解液 (陽性對照) | FAM3B Others Human 人 FAM3B 人細胞裂解液 (陽性對照) |
BRL-3A(大鼠正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M038小鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞培養(yǎng)基100mL 人耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16 | 豬靜脈血管內(nèi)皮細胞;ZYM-SVEC01 骨肉瘤細胞，SW1353細胞 EMT-6細胞，小鼠癌細胞株 |
CM-R028大鼠食管平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL | 兔棕色前脂肪原代細胞巨噬細胞移動抑制因子抗體 |
RSC96大鼠雪旺細胞 Schwann cells in RSC96 rats DMEM+10%FBS | 人脈絡(luò)叢成纖維細胞HCPF |
MT-4 人急性淋巴母細胞白血病細胞 | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/UT31413II/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
HWP visceral Pellet 人類內(nèi)臟白前脂肪細胞團塊 > 1 mio.cells 人真皮微血管內(nèi)皮細胞總RNAHDMEC NA | 粘蛋白-1/上皮膜抗原抗體 |
可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1抗體 | GES-1細胞，人胃粘膜細胞 人上皮瘤細胞,SH-SY5Y細胞 大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞;BOS-5 |
Bcl2抑凋亡蛋白Bag3抗體 | 細胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 |
膠質(zhì)蛋白(肝癌相關(guān)基因2)抗體 | IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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