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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠表皮角化細(xì)胞先蛋白酶消化、后-膠原酶混合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠表皮角化經(jīng)PCNA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠表皮角化原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 皮膚組織 |
英文名稱 | Mouse Epidermal Keratinized Cells | 貨號(hào) | YS-01X7513 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠表皮角化細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角化細(xì)胞（KC）是構(gòu)成表皮的主要細(xì)胞成分，在體內(nèi)處于不斷增殖過(guò)程中，分裂的角化細(xì)胞主要位于其基底層，少數(shù)位于棘細(xì)胞層。隨著向表層的推移，細(xì)胞的分化程度逐漸增加，并喪失分裂活性。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
P3/NS1/1-Ag4-1細(xì)胞，鼠骨髓瘤細(xì)胞 人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞,RAMOS(RA.1)細(xì)胞 小鼠子細(xì)胞;U14 | 固醇酰A脫氫酶1抗體 |
Rho GTP酶激活蛋白1/血管畸形骨肥大綜合征相關(guān)蛋白抗體 | 細(xì)胞分裂周期調(diào)控蛋白45抗體 |
酸乙轉(zhuǎn)移酶A抗體 | 蛋白激酶B2 |
肌肉接頭蛋白SNTA1抗體 | 配對(duì)盒基因7抗體 |
鋅指蛋白403/喉癌相關(guān)蛋白1抗體 | 雞傳染性法氏囊病病毒抗體 |
ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | F344大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells |
NW38細(xì)胞，人黑色素瘤細(xì)胞 鼠李糖乳桿菌 人膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞;U251 | ANGPT2 Protein Mouse 重組小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
人晶狀體上皮細(xì)胞HLEpiC | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1036 |
CL-0133KLE(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 小鼠食管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
長(zhǎng)尾綠猴胚胎細(xì)胞;4179 病毒轉(zhuǎn)染小鼠細(xì)胞，PT-67細(xì)胞 SMMC-7721(肝癌細(xì)胞) | 小鼠表皮角化原代細(xì)胞蛋白激酶B2 |
人胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38 [WI38] | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-M044小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
雪羊皮膚細(xì)胞;SSHS1 | 四分子交聯(lián)體20抗體（四旋蛋白） |
肺癌相關(guān)蛋白8抗體 | 牛腎細(xì)胞;MDBK |
抑癌基因NDRG4抗體 | 白細(xì)胞介素6受體α抗體IL-6Rα |
顆粒蛋白前體抗體 | ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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