小鼠真皮毛乳頭原代細(xì)胞

小鼠真皮毛乳頭原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：雞原代肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 人肺腺癌細(xì)胞 英文 H1299 CGM1 人EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞 1ml/T75 Saos-2，人成骨肉瘤細(xì)胞 OK 負(fù)鼠細(xì)胞 小鼠原代牙齦上皮細(xì)胞

小鼠真皮毛乳頭原代細(xì)胞

小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細(xì)胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進(jìn)的真皮毛乳頭，中心是一根毛發(fā)，立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上，附著點(diǎn)的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個(gè)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織。毛囊實(shí)際上是由結(jié)締組織和上皮兩部分所組成，除了具有結(jié)締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外，毛囊其余部分都是由表皮細(xì)胞分化而來。真皮毛乳頭細(xì)胞位于毛囊基底部，是一類成纖維細(xì)胞。在毛囊發(fā)育早期，真皮細(xì)胞向單層上皮細(xì)胞發(fā)出第一真皮信號，刺激上皮局部形成毛基板。隨后毛基板細(xì)胞向下方的真皮發(fā)出第一表皮信號，誘導(dǎo)其形成有成纖維細(xì)胞組成的凝集細(xì)胞團(tuán)。在此過程中，毛母質(zhì)細(xì)胞逐漸包裹凝集細(xì)胞團(tuán)，形成成熟的真皮毛乳頭細(xì)胞。作為毛囊中的重要細(xì)胞群，真皮毛乳頭細(xì)胞的分子機(jī)制和臨床應(yīng)用正在被逐漸認(rèn)識和解析。

產(chǎn)品名稱：小鼠真皮毛乳頭細(xì)胞

組織來源：皮膚組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠真皮毛乳頭采用膠原酶-蛋白酶混合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠真皮毛乳頭經(jīng)層粘連蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。