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大鼠ELISA試劑盒其優(yōu)點為
閱讀:98 發(fā)布時間:2018-6-6提 供 商 | 上海撫生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 80.5KB |
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大鼠ELISA試劑盒其優(yōu)點為:
1. 相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài);
2. 蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的,可以避免人為的影響;
3. 可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。
實驗流程為:
1. 轉(zhuǎn)染后24-48 h 可收獲細(xì)胞,加入適量細(xì)胞裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑),冰上裂解30min, 細(xì)胞裂解液于4°C, zui大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清;
2. 取少量裂解液以備Western blot分析,剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液,4°C緩慢搖晃孵育過夜;
3. 取10μl protein A 瓊脂糖珠,用適量裂解緩沖液洗3 次,每次3,000 rpm離心3 min;
4. 將預(yù)處理過的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,使抗體與protein A瓊脂糖珠偶連;
5. 免疫沉淀反應(yīng)后,在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min,將瓊脂糖珠離心至管底;將上清小心吸去,瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3-4次;zui后加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液,沸水煮5分鐘;
6. SDS-PAGE, Western blotting或質(zhì)譜儀分析。
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人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)ELISA試劑盒 ,英文名: HIT ELISA Kit
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