培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Caspase 2分光光度法檢測試劑盒 | Caspase-2 Colorimetric Assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織caspase-2 檢測。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。Caspase-2(Nedd2/ICH-1)是遺傳毒性壓力(genotoxic stress)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號途徑中的啟動酶,可能對于caspase-9 和caspase-3 激活和凋亡的下游事件誘導(dǎo)有重要的意義。caspase-2 的表達(dá)與組織的發(fā)育階段有關(guān),均表達(dá)于心臟、腎和腦。Caspase-2 分光光度法檢測試劑盒是將caspase-2 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán),當(dāng)該底物被caspase-2 剪切后,發(fā)色基團(tuán)即游離出來,可通過酶標(biāo)儀或分光光度計(λ=405nm 或400nm)測定其吸光值,可考察caspase-2 的活化程度。 |
注意事項
1. Caspase-2 Substrate 避光保存及使用。
2. 對某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-2 活化的機(jī)制,這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-2 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號通路。
3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個或新鮮組織50~100mg,以便能達(dá)到測定需要的100~200μg 蛋白的要求,因為Caspase-2 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測定的OD 值偏低,可通過增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
蛋白聚糖4(PRG4)elisa試劑盒英文名稱:PRG4 ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
蛋白激酶B(PKB)elisa試劑盒英文名稱:PKB ELISA Kit縮酶2抗體包裝1g
蛋白激酶A(PKA)elisa試劑盒英文名稱:PKA ELISA Kit胰腺α淀粉酶抗體包裝25g
蛋白C(Protein C)elisa試劑盒英文名稱:Protein C ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體包裝5g
膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)elisa試劑盒英文名稱:CCK ELISA Kit磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體包裝100mg
膽囊收縮素(CCK)elisa試劑盒英文名稱:CCK ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體包裝100mg
膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)elisa試劑盒英文名稱:ChAT ELISA Kit固酮還原酶家族1成員D1抗體包裝25g
膽堿磷酸甘油酯(PC/CPG)elisa試劑盒英文名稱:PC/CPG ELISA Kit肝血管生成素相關(guān)蛋白抗體包裝5g
膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)elisa試劑盒英文名稱:CETP ELISA Kit自解酶結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體包裝25g
膽固醇(CH)elisa試劑盒英文名稱:CH ELISA Kit?;蝓ッ?包裝5g
單核細(xì)胞趨化蛋白5(MCP-5)elisa試劑盒英文名稱:MCP-5 ELISA Kit溶血磷脂酸酰基轉(zhuǎn)移酶β抗體包裝25g
單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)elisa試劑盒英文名稱:MCP-4/CCL13 ELISA KitAFP4b蛋白抗體包裝5g
單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)elisa試劑盒英文名稱:MCP-3/CCL7 ELISA Kit載脂蛋白C2抗體包裝100g
單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)elisa試劑盒英文名稱:MCP-2/CCL8 ELISA Kit載脂蛋白A5抗體包裝25g
單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)elisa試劑盒英文名稱:MCP-1 ELISA Kit載脂蛋白A2抗體包裝5g
凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端)結(jié)締組織生長因子(CTGF)CGK733 是一種有效的 ATM/ATR 抑制劑,用于癌癥研究。
Caspase 2分光光度法檢測試劑盒原花青素B2
其他 原矢車菊素B2
英文名稱: Procyanidin B2
其他英文名稱: 4,8″-Bi-[(+)-epicatechin];cis,cis″-4,8″-Bi(3,3′,4′,5,7-pentahydroxyflavane)
產(chǎn)品規(guī)格: BR,98%
包 裝: 25毫克
CAS號:29106-49-8
C30H26O12=578.52
級別:BR
含量:≥98.0%
性狀:紅棕色粉末,氣微、味澀,溶于水和大多有機(jī)溶劑。
用途:生化研究。是一種有著特殊分子結(jié)構(gòu)的生物類黃酮,是自由基有效的天然抗氧化劑
保存:2~8℃