詳細(xì)介紹
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
SB-743921 | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
商品介紹:
SB-743921是第二代高活性KSP抑制劑,Ki為0.1nM,對(duì)MKLP1,Kin2,Kif1A,Kif15,KHC,Kif4和CENP-E無親和力。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):940929-33-9 純度:98.25% 分子量:553.52 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
釀酒酵母Ralstonia eutropha
釀酒酵母Pseudomonas oleovorans
側(cè)耳Pseudomonas putida
蠟樣芽孢桿菌Achromobacter xylosoxidans
玉米黑粉菌Pseudomonas putida
中慢生華癸根瘤菌Pseudomonas putida
可可球二孢Burkholderia gladioli
粘著劍菌Burkholderia sp.
食油假單胞菌Acinetobacter lwoffii
嗜腐爛居真菌細(xì)菌Pseudomonas alcaligenes
深紅沙雷氏菌Pseudomonas putida
異常漢遜酵母異常變種Pseudomonas putida
短小芽胞桿菌(已復(fù)核)Pseudomonas aeruginosa
玉蜀黍赤霉(麥類赤霉病菌)Burkholderia gladioli
包圍漆斑菌Pseudomonas sp.
楚氏喜鹽芽孢桿菌Achromobacter xylosoxidans
墳?zāi)构?jié)桿菌Arthrobacter│tumbae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
弗雷德里克斯堡假單胞菌Pseudomonas│frederiksbergensis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
KSP抑制劑(SB-743921)L-甘-甘-纈三肽
其他甘酰-甘酰-L-纈
英文名稱:Gly-Gly-Val
其他英文名稱:Glycylglycyl-L-Valine
產(chǎn)品規(guī)格:BR,98%
包裝:1克/5克
CAS號(hào):20274-89-9
C7H14N2O3=174.20
級(jí)別:BR
含量:≥98.0%
干燥失重:≤0.50%
灼燒殘?jiān)?/span>≤0.10%
性狀:結(jié)晶粉末
用途:生化研究
保存:RT