化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
兔肝間質(zhì)細胞永生化
一、細胞基本屬性
細胞名稱 | 兔肝間質(zhì)細胞永生化 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 1×106 |
商品貨號 | A01X1191 |
細胞詳述
胎肝是胚胎發(fā)育中晚期的主要造血器官，具有特殊的生物學(xué)活性。研究表明胎肝間質(zhì)細胞與骨髓間質(zhì)細胞一樣具有多向分化能力，而且能改善小鼠腎衰模型和糖尿病模型的癥狀。
該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。
注意事項： 收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細胞。
細胞特性
1) 細胞來源于實驗動物正常胚胎肝組織。
2) 細胞鑒定：CD44免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5) 細胞生長方式：長梭狀細胞，貼壁培養(yǎng)。
實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔臍靜脈內(nèi)皮細胞 | OP9小鼠骨髓基質(zhì)細胞專用培養(yǎng)基 |
RAS癌基因家族蛋白RAB40C抗體 | AF555標(biāo)記的癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子抗體 |
MC3T3-E1subclone 14小鼠顱頂前骨亞克隆14細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的LSM6蛋白抗體 |
MEF小鼠胚胎成纖維細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的激活受體1A抗體 |
MEF小鼠胚胎成纖維細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的DULLARD蛋白抗體 |
MEF(絲裂霉C處理)小鼠胚胎成纖維細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的乙醛脫氫16家庭A1抗體 |
MEF(絲裂霉C處理)小鼠胚胎成纖維細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的5-三磷肌醇受體1抗體 |
MFC小鼠前胃癌細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的蛋白激C α抗體 |
MFC小鼠前胃癌細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的胃泌抑制肽受體抗體 |
MH-S小鼠肺泡巨噬細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 |
MH-S小鼠肺泡巨噬細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的磷酯Cβ1抗體 |
MLE-12小鼠肺上皮細胞專用培養(yǎng)基 | 兔肝間質(zhì)細胞永生化AF555標(biāo)記的高遷移率家族蛋白3抗體 |
MLE-12小鼠肺上皮細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的絲氨/精氨相關(guān)核基質(zhì)蛋白1抗體 |
MS1小鼠胰島內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的己糖激2抗體 |
NIH/3T3小鼠胚胎細胞專用培養(yǎng)基 | AF555標(biāo)記的真核翻譯起始因子2C4抗體 |
注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
化工儀器網(wǎng)