操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱(chēng):支原體檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Mycoplasma Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:100T-200T
發(fā)貨周期:1~3天
本試劑盒是利用熒光染料檢測(cè)支原體污染。這種染料會(huì)結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域,因?yàn)橹гw的DNA中A-T含量高(55%~80%),所以可將其染色而被檢測(cè)到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周?chē)煽吹皆S多大小均一的熒光小點(diǎn),即為支原體的DNA染色斑,說(shuō)明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。 |
操作步驟:
貼壁細(xì)胞:
1.被檢細(xì)胞接種于無(wú)菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,接種密度為1-2×104。同時(shí),接種正常無(wú)支原體感染的同種細(xì)胞,作為陰性對(duì)照。
2.5天后,先吸去培養(yǎng)液,再加入1ml的固定液,靜置20min,
3.吸去固定液,晾干。
4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15-20min或室溫靜置20~30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml滅菌超純水洗滌三次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液,并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周?chē)欠裼兴{(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
懸浮細(xì)胞:
1.收集需檢測(cè)的細(xì)胞,1500rpm,5min。
2.將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,再加1ml的固定液,靜置20min。
3.吸去固定液,晾干。
4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15~20min或室溫靜置20~30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液,用無(wú)菌水洗滌玻片3次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液,并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周?chē)欠裼兴{(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)elisa試劑盒英文名稱(chēng):8-OHdG ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框194抗體包裝1g
70kDa熱休克蛋白8(HSPA8)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HSPA8 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框198抗體包裝25g
70kDa熱休克蛋白5(HSPA5)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HSPA5 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框21抗體包裝5g
70kDa熱休克蛋白1A(HSPA1A)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HSPA1A ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框216抗體包裝1g
60kD熱休克蛋白(HSPD1)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HSPD1 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體包裝25g
5羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(SERT)elisa試劑盒英文名稱(chēng):SERT ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框50抗體包裝5g
5-羥色胺(5-HT)elisa試劑盒英文名稱(chēng):5-HT ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框49抗體包裝1g
5-羥基吲哚乙(5-HIAA)elisa試劑盒英文名稱(chēng):5-HIAA ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框53抗體包裝5g
50kDa核孔蛋白(NUP50)elisa試劑盒英文名稱(chēng):NUP50 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體包裝1ml
27kDa熱休克蛋白(HSPB1)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HSPB1 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框55抗體包裝5g
25-羥基維生D3(HVD3)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HVD3 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框56抗體包裝100g
25kDa突觸關(guān)聯(lián)蛋白(SNAP25)elisa試劑盒英文名稱(chēng):SNAP25 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框65抗體包裝25g
210kDa核孔蛋白(NUP210)elisa試劑盒英文名稱(chēng):NUP210 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框64抗體包裝100g
20S-蛋白體(20S-PSM)elisa試劑盒英文名稱(chēng):20S-PSM ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框69抗體包裝25g
2',5'-寡腺苷合成1(OAS1)elisa試劑盒英文名稱(chēng):OAS1 ELISA Kit1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框77抗體包裝500g
馬氏副球菌Paracoccus│marcusii 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,三合物胰脂肪試劑盒異槲皮苷;Isoquercitrin
海假交替單胞菌Pseudoalteromonas│marina 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品胰抑制試劑盒異鼠李-3-O-新橙皮苷;Isorha
結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR胰腺癌標(biāo)志物CA242 elisa試劑盒原蘇木B;Protosappanin
支原體檢測(cè)試劑盒一縮二乙二
其他 二甘;二乙二;雙甘;2,2'-氧代二乙
英文名稱(chēng): Diethylene glycol
其他英文名稱(chēng): β,β′-Dihydroxydiethyl ether;Diglycol;2,2′-Oxybisethanol; 2,2′-Oxydiethanol
產(chǎn)品規(guī)格: 色標(biāo)
包裝:2毫升
產(chǎn)品規(guī)格: 色固
包裝:25毫升
產(chǎn)品規(guī)格: CP
包裝:500毫升
CAS號(hào):111-46-6
C4H10O3=106.12
級(jí)別:GCS
級(jí)別:色固
級(jí)別:CP
沸程:241~248℃
密度(20℃):1.115~1.118g/ml
度(以H+計(jì)):≤0.34 mmol/100g
折光率(n20D):1.446~1.448
灼燒殘?jiān)?/span>≤0.01%
性狀:無(wú)色粘稠液體。無(wú)氣味。微帶甜味。易吸濕。能與乙、酮、乙二混溶,幾乎不溶于。相對(duì)密度(d2020)1.118。熔點(diǎn)-6.5℃。沸點(diǎn) 244~245℃。折光率(n20D)1.4475。閃點(diǎn)(開(kāi)杯)143℃。半數(shù)致死量(大鼠,經(jīng)口)20.76g/kg。有刺激性
用途:生化研究。溶劑。萃取劑。氣體脫水劑。軟水劑。防凍劑。潤(rùn)滑劑。氣相色譜固定液(高使用溫度50℃),適用于水溶液分析,選擇性與聚乙二相似,用于分析含氧化合物(特別是)、胺、脂肪胺、吡啶和喹啉。
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