CCK-8試劑盒

CCK-8試劑盒正在出售的產(chǎn)品：兔子α2抗纖溶黃芩Human
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大鼠高鐵血紅蛋白黃藤Human, Mouse
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弓形蟲抗體 IgG(間接法二步法)黃楊(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Rat
弓形蟲抗體 IgM(間接法二步法)黃鐘花醌;拉帕 (標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
弓形蟲抗體 IgM(捕獲法

中文名稱：CCK-8試劑盒

英文名稱：Cell counting KIT-8

產(chǎn)品規(guī)格：100T|500T|500T*10

發(fā)貨周期：1～3天

使用說(shuō)明：

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí))

1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。

3、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X 軸)，OD 值為縱坐標(biāo)(Y 軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。)

二、細(xì)胞活性檢測(cè)

1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在37℃,5% CO2的條件下)。

2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

5、如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性，則測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè)，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

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大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A3試劑盒α-亞麻;alpha-Linoleni

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CCK-8試劑盒（豬胰）

英文名稱：Trypsin(porcine pancreas)

產(chǎn)品規(guī)格：BR，1：250

包裝：100克/500克/25克

產(chǎn)品規(guī)格：組織培養(yǎng)級(jí)，1：300

包裝：50克/250克

CAS號(hào)：9002-07-7

分子量：23300

級(jí)別：BR

效價(jià)：1：250

活力：≥250U/mg

干燥失重：≤5.0%

級(jí)別：Tissue culture grade

性狀：類淡黃色粉末。適溫度35～37℃。反應(yīng)：甘油三酯+H2O＝甘油二酯+脂肪陰離子。對(duì)一級(jí)酯基團(tuán)易水解。甘油單酯是差的底物。有兩個(gè)差不多相同的同工脂肪： A與B。等電點(diǎn)(pI)A為4.9、 B為5.0。吸光系數(shù)(E1%280)13.3。激活劑為鈣(CA2+)。

用途：生化研究。定量分析血清中甘油三酯。前列腺脂的分析。脂肪分析。用于水解酯鍵1，3位，分解脂肪成甘油和脂肪

保存：2～8℃

操作規(guī)程：

1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000～0000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～0μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。

5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×00

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)