操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱(chēng):Caspase-3活性測(cè)定試劑盒
英文名稱(chēng):Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
本試劑盒適用于測(cè)定哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞caspase-3活性。測(cè)定原理基于Caspase-3特異水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA),釋放硝基pNA。游離硝基pNA呈黃色在405nm具有大吸收峰,用普通可見(jiàn)光分光光度比色方法測(cè)定。根據(jù)pNA標(biāo)準(zhǔn)管吸光度OD值和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),計(jì)算來(lái)自底物肽釋放的pNA濃度,得到Caspase-3水解活性。 |
Caspase-3是凋亡過(guò)程中主要的終末剪切酶,因而也是研究多的caspase,它激活pro-caspase-2,6,7,9等,特異水解多種凋亡關(guān)鍵蛋白如PARP,介導(dǎo)細(xì)胞核染色質(zhì)固縮、凋亡小體生成、核DNA斷裂。
運(yùn)輸及保存:試劑常溫運(yùn)輸。到達(dá)后按要求儲(chǔ)存,1年內(nèi)穩(wěn)定。
所需儀器:酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板;或可見(jiàn)光分光光度計(jì)配100μl容積的石英比色杯。
工作波長(zhǎng):大吸收波長(zhǎng)405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測(cè)定,但靈敏度略降。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
磺二嘧啶 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Oseltamivir phosphate 凝集蛋白家族11抗體包裝1g
磺二氧基嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Oseltamivir phosphate 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝5g
磺惡唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Dibucaine HCl20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框96抗體包裝25g
磺基嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Donepezil 3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框26抗體包裝5g
磺氧噠(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Doripenem 粘附分子2抗體包裝25g
磺間二氧嘧啶鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Doripenem 耳聾-狀腺腫綜合征相關(guān)COBL蛋白抗體包裝5g
磺間氧嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Doxapram Hydrochloride20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框195抗體包裝1g
磺脒(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Doxapram Hydrochloride7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框62抗體包裝1g
磺嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Doxylamine succinate9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框174抗體包裝1g
磺嘧啶鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Doxylamine succinate6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框64抗體包裝25g
磺嘧啶銀(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Drospirenone免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體包裝5g
磺噻唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Drospirenone透明質(zhì)介導(dǎo)游走受體抗體包裝1g
磺異噁唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Ethiny Estradiol周期樣Y1抗體包裝5g
磺芐西林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Ethiny Estradiol周期J抗體包裝100ml
磺草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Ethionamide周期L抗體包裝25g
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR心肌肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒吳茱萸內(nèi)酯;Evodine
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BP協(xié)同激分子受體試劑盒五味子;Schisandrin C
鏈狀假絲酵母Candida│catenulata 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品小而密低密度脂蛋白試劑盒五味子乙;schisandrol B
Caspase-3活性測(cè)定試劑盒鹽黃連
其他 鹽小檗堿;小檗堿鹽鹽;3-二正丁基基-1-炔;黃苓苷;鹽小薜堿;黃蓮鹽鹽
英文名稱(chēng): Berberine hydrochloride
其他英文名稱(chēng): Berberine chloride form;Natural Yellow 18
產(chǎn)品規(guī)格: BR,98%
包 裝: 5克/25克
產(chǎn)品規(guī)格: 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%
包 裝: 20毫克
CAS號(hào):633-65-8
C20H18ClNO4=371.81
級(jí)別:BR
含量:≥98.0%(TLC)
水分:8~15%
級(jí)別:分析標(biāo)準(zhǔn)品
含量:≥98.0%(TLC)
性狀:黃色至橙色粉末。一種生物堿,熔點(diǎn):200℃。
用途:生化研究。用于在肥大細(xì)胞中肝鈉的熒光染色。一種生物堿,帶有弱的特性,多重耐藥外排泵(MDR efflux pumps)的底物。 berberine的抗微生物活性可被MDR抑制劑5-methoxyhydnocarpin (5-MHC)強(qiáng)化。Berberine調(diào)控肝癌細(xì)胞Pgp基因的表達(dá)
保存:RT