培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
姬姆薩染料為天青色素、次甲藍(lán)的混合物,本染色液適于血液涂抹標(biāo)本、血球、瘧原蟲、立克次體以及骨髓細(xì)胞、脊髓細(xì)胞等的染色。 染前用蛋白酶等進(jìn)行處理,然后再用姬姆薩染液染色,在染色體上,可以出現(xiàn)不同濃淡的橫紋樣著色。姬姆薩染液可將細(xì)胞核染成紫紅色或藍(lán)紫色,胞漿染成粉紅色,在光鏡下呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞及染色體圖像。
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試劑盒組份:
10×姬姆薩染色原液 25mL
10×姬姆薩稀釋液 25mL
染色步驟1.根據(jù)需要量,取8ml 雙蒸水,加入姬姆薩原液1ml,再加入姬姆薩稀釋液1ml,混勻即為工作液,此工作液常溫可保存兩周(如果無法短期用完,請(qǐng)確保姬姆薩原液不要見到水或者其他緩沖液)。2.按常規(guī)方法制備血涂片,待血膜干后,用甲醇固定2~3 分鐘;3.將血涂片或骨髓涂片放置染色架上,滴加2~3 滴染色工作液,使覆蓋全部血膜(具體用量視樣品大小而定),室溫染色15~30 分鐘。4.用自來水緩慢從玻片一端沖洗(注意勿先倒去染液或直接對(duì)血膜沖洗),涼干后鏡檢。
四、注意事項(xiàng)1.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。2.如果染色過濃或者過淡,請(qǐng)調(diào)整姬姆薩原液加入量(姬姆薩原液常用的稀釋比例是10 倍,但有時(shí)候可能會(huì)稀釋5 倍或者15 倍)。3.姬姆薩原液采用常規(guī)方法配制(姬姆色素:甘油:甲醇=1:66:66),請(qǐng)?jiān)谑褂脮r(shí)小心不要接觸到水。否則時(shí)間長了會(huì)失效。
儲(chǔ)存:2~8℃,避光,有效期12個(gè)月。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
3'-氧基葛根英文名稱: Tween-80類表皮生長因子域7抗體包裝100g
3'-牻牛兒基-3-異戊烯基-5,7,2',4'-四羥...英文名稱: Tween-80α彈性蛋白抗體包裝25g
3'-羥基葛根英文名稱: Potassium-D-gluconate黃熱病包膜糖蛋白抗體包裝500g
3'-羥基紫檀茋英文名稱: PF562271HER2受體抗體包裝1g
3,29-二?;闃侨嗜?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sodium alginate from brown;Algin轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗體包裝250mg
3,3'-二基鞣花-4'-O-葡萄糖苷英文名稱: Collagenase, Type1磷化表皮生長因子受體抗體包裝5g
3,6-二芥子酰基蔗糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Collagenase, Type2磷化表皮生長因子受體抗體包裝1g
3-(3-羥基基)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Collagenase, TypeIV磷化表皮生長因子受體抗體包裝25g
3-Deoxyaconitine英文名稱: Sodium molybdate磷化埃茲蛋白抗體包裝100g
3-O-Acetyl-16α-hydroxytrame...英文名稱: Magnesium silicate磷化埃茲蛋白抗體包裝25g
3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李...英文名稱: Sodium L-ascorbate磷化轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體包裝10MG
3-O-乙?;?16α-羥基松苓新英文名稱: Sodium pyrophosphate磷化酪蛋白激A2受體抗體包裝1g
3’-氧基芹菜苷;柯伊利-7-O-葡萄糖-2-O-...英文名稱: Ammonium bicarbonateEphrin B抗體包裝1g
3β,7β,12β-三羥基-11,15-二羰基-羊毛甾...英文名稱: Ammonium chloride磷化Ephrin B抗體包裝1g
3β,7β,15β-三羥基-11-羰基-羊毛甾烷-8-...英文名稱: Salicylic acid磷化Ephrin B抗體包裝25g
海芽孢桿菌Bacillus│aquimaris 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品胎兒纖連蛋白試劑盒瑞香二;7,8-dimethoxy
: =IFFI13038資源名稱: 綠色木霉=木木霉 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR,BP2010鎖鏈試劑盒瑞香-7-;Daphnetin 7
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品羧基賴試劑盒人參皂苷Rk3;Ginsenoside
姬姆薩染液(10×)香柏油
其他 柏木油;檜油;洋杉木油;金松油;雪松;雪松油;油鏡油
英文名稱: Cedarwood oil
其他英文名稱: Cedar Oil
產(chǎn)品規(guī)格: FMP
包 裝: 25毫升
CAS號(hào):8000-27-9
級(jí)別:FMP
折光率(n20D):1.514~1.516
值:≤60mgKOH/g
冷卻試驗(yàn):合格
二甲溶解試驗(yàn):合格
性狀:無色或微黃色略有粘性液體。系蒸餾柏木而得的芳香油,其中含有油精和柏木腦等成分。對(duì)光敏感。溶于10~20份90%乙,不溶于水。相對(duì)密度(d2020)0.940~0.950。比旋光度-25~-46°。閃點(diǎn)110℃。有刺激性。商品也有以倍半萜烯、松香等配合成的人造香柏油,呈淺黃色揮發(fā)性液體
用途:生化研究。顯微鏡油。香料。驅(qū)蟲劑
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