培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
臺盼藍(lán) | Trypan blue | 10g | 1~3天 |
商品介紹:
臺盼藍(lán)(Trypan Blue),一種偶氮、親水性酸性藍(lán)色染料,可透過死亡細(xì)胞和垂死細(xì)胞的細(xì)胞膜,將其染成藍(lán)色,而活細(xì)胞由于其細(xì)胞膜的完整性,可將臺盼藍(lán)排斥在外,因此,通過顏色的變化即可將活細(xì)胞(活細(xì)胞呈透明無色)和死細(xì)胞鑒別開來,基于此原理,本品廣泛用于細(xì)胞活性水平的常規(guī)評估。細(xì)胞計(jì)數(shù)前,需要用生理鹽緩沖液或者無血清培養(yǎng)基對細(xì)胞進(jìn)行充分的清洗,因?yàn)榧?xì)胞對血清蛋白具有非常高的親和力,因此殘留的血清蛋白會導(dǎo)致較暗的染色背景。 |
臺盼藍(lán)還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺盼藍(lán)與蛋白結(jié)合形成的復(fù)合物可發(fā)出紅色熒光。另外,臺盼藍(lán)(合適濃度)還常用來淬滅細(xì)胞表面的自熒光或者其他熒光信號。
本品為細(xì)胞培養(yǎng)級別,臺盼藍(lán)染色法主要用來鑒定組織分離到原代細(xì)胞的存活情況。只需3-5min染色,即可通過血球計(jì)數(shù)法分析結(jié)果。
中文別名:直接藍(lán)14;錐蟲藍(lán);曲利苯藍(lán)
英文別名:Direct Blue 14; Dianil blue; Diaminine Blue
CAS:72-57-1
分子式:C34H24N6Na4O14S4
分子量:960.81
外觀:棕色至黑褐色、黑色、黑褐色粉末
組分:染料含量,>40%
溶解性:溶于水(10mg/ml)
儲存條件:室溫
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
激活蛋白C(APC)elisa試劑盒英文名稱:APC ELISA Kit9號染色體開放閱讀框139抗體包裝1g
激活T-細(xì)胞核因子1(NFATC1)elisa試劑盒英文名稱:NFATC1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框140抗體包裝5g
基質(zhì)細(xì)胞衍生因子4(SDF4)elisa試劑盒英文名稱:SDF4 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框142抗體包裝1g
基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF1)elisa試劑盒英文名稱:SDF1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框163抗體包裝5g
基質(zhì)金屬蛋白9(MMP9)elisa試劑盒英文名稱:MMP9 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框169抗體包裝25g
基質(zhì)金屬蛋白8(MMP8)elisa試劑盒英文名稱:MMP8 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框173抗體包裝5g
基質(zhì)金屬蛋白7(MMP7)elisa試劑盒英文名稱:MMP7 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框21抗體包裝100g
基質(zhì)金屬蛋白3(MMP3)elisa試劑盒英文名稱:MMP3 ELISA Kit磷化絲/蘇蛋白激II β/casein kinase IIβ抗體包裝25g
基質(zhì)金屬蛋白23B(MMP23B)elisa試劑盒英文名稱:MMP23B ELISA Kit癌胚抗原抗體包裝100g
基質(zhì)金屬蛋白2(MMP2)elisa試劑盒英文名稱:MMP2 ELISA Kit癌胚抗原抗體包裝25g
基質(zhì)金屬蛋白19(MMP19)elisa試劑盒英文名稱:MMP19 ELISA Kit粘附分子相關(guān)蛋白/癌基因下調(diào)蛋白抗體包裝500g
基質(zhì)金屬蛋白15(MMP15)elisa試劑盒英文名稱:MMP15 ELISA Kit淋巴抗原Ly6c抗體包裝25g
基質(zhì)金屬蛋白14(MMP14)elisa試劑盒英文名稱:MMP14 ELISA Kit周期E抗體包裝5g
基質(zhì)金屬蛋白13(MMP13)elisa試劑盒英文名稱:MMP13 ELISA Kit7號染色體開放閱讀框50抗體包裝25g
基質(zhì)金屬蛋白12(MMP12)elisa試劑盒英文名稱:MMP12 ELISA Kit7號染色體開放閱讀框53抗體包裝5g
: =JCM3025=CBS429.61=DSM43023=IFM1175=IFO13資源名稱: 白色鏈孢囊菌 質(zhì)量規(guī)格:>95%,EP,BR脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒銀杏雙黃酮;ginkgetin
雅致小克銀漢霉Cunninghamella│elegans 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定整合連接激1試劑盒楊芽黃;Tectochrysin
葡萄座腔菌屬Botryosphaeria│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP34整合β4結(jié)合蛋白試劑盒魚藤;deguelin
臺盼藍(lán)乙-α-萘酯
其他乙-1-萘酯;醋-1-萘酯;1-乙萘基酯;α-乙萘酯;1-萘基乙酯
英文名稱:α-Napthyl acetate
其他英文名稱:1-Napthyl acetate
產(chǎn)品規(guī)格:CP,98%
包 裝: 25克
CAS號:830-81-9
C12H10O2=186.21
級別:CP
含量:≥98.0%
熔點(diǎn):47~49℃
度(以H+計(jì))/(mmol/100g):≤1.65
乙溶解試驗(yàn):合格
用途:生化研究。組織化學(xué)中測定酯的底物。有機(jī)合成
保存:RT,避光