商品介紹:
本試劑盒提供了一種經(jīng)典而又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死檢測(cè)方法。染色快速方便,兩種染料的染色僅需20-30分鐘,一步染色即可完成。使用方便,使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),無(wú)需稀釋等配制過(guò)程,也無(wú)需再準(zhǔn)備其它任何溶液。本試劑盒足夠檢測(cè)100個(gè)樣品,每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可以為10-100萬(wàn)。 |
試劑盒組份:
細(xì)胞染色緩沖液———100ml
Hoechst染色液———0.5ml
PI染色液——————0.5ml
本試劑盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)雙染的方法。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),染色質(zhì)會(huì)固縮。
Hoechst 33342可以穿透細(xì)胞膜,染色后凋亡細(xì)胞熒光會(huì)比正常細(xì)胞明顯增強(qiáng)。碘化丙啶(PI)不能穿透細(xì)胞膜,對(duì)于具有完整細(xì)胞膜的正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞不能染色。而對(duì)于壞死細(xì)胞,其細(xì)胞膜的完整性喪失,碘化丙啶(PI)可以染色壞死細(xì)胞。上述兩種染料雙染后,使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)時(shí),正常細(xì)胞為弱紅色熒光+弱藍(lán)色熒光,凋亡細(xì)胞為弱紅色熒光+強(qiáng)藍(lán)色熒光,壞死細(xì)胞為強(qiáng)紅色熒光+強(qiáng)藍(lán)色熒光。參考下圖,左圖為誘導(dǎo)凋亡前的正常細(xì)胞,右圖為誘導(dǎo)凋亡后的細(xì)胞。
儲(chǔ)存條件:-20℃避光,有效期一年。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
細(xì)胞凋亡與壞死檢測(cè)試劑盒 | Apoptosis and Necrosis Assay Kit | 100次 | 1~3天 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
血纖蛋白原(Fbg)elisa試劑盒英文名稱(chēng):Fbg ELISA Kit脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體包裝100g
血纖蛋白(fibrin)elisa試劑盒英文名稱(chēng):fibrin ELISA Kit脂聯(lián)素受體1抗體包裝25g
血栓素B2(TXB2)elisa試劑盒英文名稱(chēng):TXB2 ELISA Kit腎上腺髓質(zhì)素受體抗體包裝500g
血栓素A2(TXA2)elisa試劑盒英文名稱(chēng):TXA2 ELISA Kit脂聯(lián)素抗體包裝1g
血栓前體蛋白(TpP)elisa試劑盒英文名稱(chēng):TpP ELISA Kit腎上腺髓質(zhì)素抗體包裝1g
血清總補(bǔ)體(CH50)elisa試劑盒英文名稱(chēng):CH50 ELISA Kit腺苷受體A3抗體包裝5g
血清素/血清胺(ST)elisa試劑盒英文名稱(chēng):ST ELISA KitADRA2腎上腺素能受體2抗體包裝1g
血清淀粉樣蛋白A3(SAA3)elisa試劑盒英文名稱(chēng):SAA3 ELISA Kit腎上腺素能受體β1抗體包裝5g
血清淀粉樣蛋白A(SAA)elisa試劑盒英文名稱(chēng):SAA ELISA Kit腎上腺素能受體β2/β2-AR抗體包裝1g
血漿激肽釋放酶(KLKB1)elisa試劑盒英文名稱(chēng):KLKB1 ELISA Kit晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體包裝25g
血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)elisa試劑盒英文名稱(chēng):GMP-140 ELISA Kit軟骨蛋白聚糖抗體包裝5g
血紅素氧合酶2(HO-2)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HO-2 ELISA Kit5-氨基乙酰酸合酶1抗體包裝100g
血紅素氧合酶1(HO-1)elisa試劑盒英文名稱(chēng):HO-1 ELISA Kitp53凋亡激蛋白1抗體包裝500g
血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(vWF)elisa試劑盒英文名稱(chēng):vWF ELISA KitP53凋亡激蛋白2抗體包裝250mg
血管舒緩激肽(BK)elisa試劑盒英文名稱(chēng):BK ELISA Kit激活素受體2B抗體包裝1g
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1抗體白介素2(IL2)Orteronel(TAK-700) was selected as a candidate for clinical evaluation. orterone
細(xì)胞凋亡與壞死檢測(cè)試劑盒紫脲酸銨
其他氨基紫色酸;紅紫酸銨;骨螺紫;紫尿酸胺;5,5′-次氮基二巴比土酸銨鹽;5-((六氫-2,4,6-三氧代-5-嘧啶基)亞氨基)-2,4,6(1H,3H,5H)嘧啶三酮單銨鹽
英文名稱(chēng):Murexide
其他英文名稱(chēng):Acid ammonium purpurate;Ammonium purpurate;5,5′-Nitrilodibarbituric acid ammonium salt
產(chǎn)品規(guī)格:IND
包裝:25克
CAS號(hào):3051-09-0
C8H8N6O6=284.19
級(jí)別:IND
絡(luò)合試驗(yàn):合格
灼燒殘?jiān)?/span>≤0.1%
性狀:紅紫色結(jié)晶性粉末,帶有綠色金屬光澤。能與許多陽(yáng)離子形成各種顏色的絡(luò)合物。溶于熱水,微溶于冷水,幾乎不溶于乙醇。其水溶液呈深紫色,并隨pH值不同而不同,在堿性溶液中呈深藍(lán)色,在酸性溶液中為無(wú)色。水溶液極易變質(zhì)。熔點(diǎn)>300℃。大吸收波長(zhǎng)(水中)520nm。
用途:生化研究。絡(luò)合指示劑(用以滴定鈣、銅、鈷、鎳、錳、鈧、鋅等)。鈣的光度測(cè)定
用途:生化研究。酸堿指示劑
保存:RT