操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:AnnexinV-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T
發(fā)貨周期:1~3天
Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用熒光素APC標(biāo)記的Annexin V作為探針,來(lái)檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生,可用流式細(xì)胞儀或其他熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。
其檢測(cè)原理為:在正常的活細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine,PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在早期凋亡的細(xì)胞中,PS從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V(膜聯(lián)蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力結(jié)合??赏ㄟ^(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。
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另外,本試劑盒中提供的7-AAD可用來(lái)區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞。7-AAD是一種核酸染料,同PI有著相似的熒光特性,但其發(fā)射光譜較PI窄,對(duì)其他檢測(cè)通道的干擾更小,在多色熒光分析中是PI的最佳替代品,可與Annexin V聯(lián)合使用。該染料不能透過(guò)正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜,但可穿透晚期凋亡細(xì)胞或者壞死細(xì)胞并與其內(nèi)的DNA結(jié)合。因此將Annexin V-APC與7-AAD聯(lián)合使用時(shí),7-AAD則被排除在活細(xì)胞(Annexin V-/7-AAD-)和早期凋亡細(xì)胞(Annexin V+/7-AAD-)之外,而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時(shí)被Annexin V-APC和7-AAD結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽(yáng)性(Annexin V+/7-AAD+)。
試劑盒組份:
重組人Annexin V/APC*(rh Annexin V/APC)———100μl
7-AAD Viability Staining Solution——————100μl
1×Binding buffer——————————————10ml
儲(chǔ)存條件:4℃,有效期一年。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
乳腺癌易感蛋白2(BRCA2)elisa試劑盒英文名稱:BRCA2 ELISA Kit分裂周期樣激2抗體包裝25g
乳鐵傳遞蛋白(LTF)elisa試劑盒英文名稱:LTF ELISA Kit分裂周期樣激3抗體包裝5g
乳脫氫B(LDHB)elisa試劑盒英文名稱:LDHB ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框49抗體包裝1g
乳過(guò)氧化物(LPO)elisa試劑盒英文名稱:LPO ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框53抗體包裝25g
肉毒堿棕櫚?;D(zhuǎn)移1A(CPT1A)elisa試劑盒英文名稱:CPT1A ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框57抗體包裝5g
肉毒堿乙酰轉(zhuǎn)移(CRAT)elisa試劑盒英文名稱:CRAT ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框64抗體包裝1g
融合蛋白(FUS)elisa試劑盒英文名稱:FUS ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框66抗體包裝250mg
溶質(zhì)載體家族30成員7(SLC30A7)elisa試劑盒英文名稱:SLC30A7 ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框74抗體包裝1g
溶質(zhì)載體家族30成員6(SLC30A6)elisa試劑盒英文名稱:SLC30A6 ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框75抗體包裝250mg
溶質(zhì)載體家族30成員5(SLC30A5)elisa試劑盒英文名稱:SLC30A5 ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框77抗體包裝5g
溶質(zhì)載體家族30成員4(SLC30A4)elisa試劑盒英文名稱:SLC30A4 ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框78抗體包裝1g
溶質(zhì)載體家族30成員3(SLC30A3)elisa試劑盒英文名稱:SLC30A3 ELISA Kit維調(diào)節(jié)核基質(zhì)相關(guān)蛋白抗體包裝5g
溶質(zhì)載體家族30成員10(SLC30A10)elisa試劑盒英文名稱:SLC30A10 ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42抗體包裝1g
溶質(zhì)載體家族30成員1(SLC30A1)elisa試劑盒英文名稱:SLC30A1 ELISA Kit17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框97抗體包裝250mg
溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移4(LPCAT4)elisa試劑盒英文名稱:LPCAT4 ELISA Kit貓眼綜合征染色體候選基因1抗體包裝100g
猴頭菌Hericium│erinaceus (Bull.) Pers. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1試劑盒蔗糖;Sucrose
芽胞桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:945-1030 ug /mg,二物轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α試劑盒正丁基酞;3-n-Butylphath
結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定轉(zhuǎn)谷酰2C多肽試劑盒知母皂苷B;Anemarsaponin
AnnexinV-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒乙維生E
其他維生E醋酯;維生E乙酯;[2R-[2R*(4R*,8R*)]]-3,4-二氫-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-基三癸基)-2H-1-并呋喃-6-酚乙酯;D-α-生育酚醋酯;α-生育酚乙酯;醋生育酚;維他命E醋鹽
英文名稱:Vitamin E acetate
其他英文名稱:(+)-α-Tocopherol acetate;(±)-5,7,8-Trimethyltocol;2,5,7,8-Tetramethyl-2-(4′,8′,12′-trimethyltridecyl)-6-chromanol
產(chǎn)品規(guī)格:BR,98%
包裝:25克/100克/250克
CAS號(hào):58-95-7
C31H52O3=472.74
級(jí)別:BR
含量:≥98.0%
鉛:≤0.0002%
同系物:≤2.5%
溶液澄清度:≤0.5號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液
重金屬:≤0.001%
硫鹽:≤0.01%
干燥失重:≤5.0%
吸收系數(shù)(E1%1㎝):406~436
性狀:粉末。微有噻唑氣味。味苦。對(duì)光敏感。暴露于空氣中易吸濕。正常空氣濕度中吸收1mol水成水合物。248℃分解。1g約溶于1ml水、18ml甘油、100ml 95%乙、315ml無(wú)水乙,易溶于甲,溶于二、、己烷和。1%(w/V)水溶液pH為3.13;0.1%(w/V)水溶液pH為3.58。半數(shù)致死量(小鼠,經(jīng)口)8224mg/kg。
用途:生化研究。醫(yī)藥。熒光和磷光光度分析磷。熒光測(cè)定汞
保存:RT,避光