詳細介紹
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細胞00μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入00微升5000~0000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
英文名稱:Ki67 cell proliferation Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T
發(fā)貨周期:1~3天
Ki67 蛋白是細胞周期相關(guān)的一種核蛋白,主要表達于細胞增殖分裂的各個時期(G1、S、G2 和M 期),但是在靜息的細胞(G0 期)中不表達。Ki67 常用于檢測腫瘤細胞的生長指數(shù)(免疫組化法利用計算細胞總數(shù)中的Ki67 陽性細胞數(shù)所占比例得到Ki67 指數(shù))。 Ki67 通常通過標記抗Ki67 的抗體(FITC 綠色熒光)和DNA 染料碘化丙啶(PI,紅色)而利用流式細胞儀檢測來實現(xiàn)對細胞周期的檢測。 |
操作方法
1. 在最適的環(huán)境下培養(yǎng)細胞。
2. 除去培養(yǎng)液,用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶處理和收集細胞,離心,(注意1)保證每管細胞數(shù)在106 個。
4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。(注意2)
5. 沉淀細胞,*吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細胞2 次。
7. 用100μl 抗體孵育液(0.5% Tween-20/1%BSA/PBS)重懸細胞,加入1ul Ki67 抗體(1μg/106 cells),室溫孵育1 小時。
8. 離心收集細胞,用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 離心收集細胞,用50μl 抗體孵育液重懸,加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC,室溫孵育30 分鐘。離心收集細胞,150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS(pH7.4)重懸細胞。
11. 避光使細胞在室溫下孵育20min 后,離心收集細胞,150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后,轉(zhuǎn)移至流式檢測管中重懸。
12. FACS 檢測或者儲存于4℃。
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
抑制素βE(INHβE)elisa試劑盒英文名稱:INHβE ELISA Kit核糖體合成蛋白BOP1抗體包裝5g
抑制素βC(INHβC)elisa試劑盒英文名稱:INHβC ELISA Kit調(diào)節(jié)中心體分離早期相關(guān)激酶BORA抗體包裝1g
抑制素βB(INHβB)elisa試劑盒英文名稱:INHβB ELISA Kit萊姆病螺旋體抗體包裝5g
抑制素βA(INHβA)elisa試劑盒英文名稱:INHβA ELISA Kit成熟相關(guān)蛋白BOULE抗體包裝5mg
異戊烯半胱氧化酶1(PCYOX1)elisa試劑盒英文名稱:PCYOX1 ELISA Kit伸長因子結(jié)合蛋白抗體包裝100ml
乙酰羧化酶α(ACACα)elisa試劑盒英文名稱:ACACα ELISA Kit特異性堿性蛋白Y2抗體包裝25ml
乙脫氫酶7(ADH7)elisa試劑盒英文名稱:ADH7 ELISA Kit癌易感基因2相關(guān)蛋白抗體包裝1mg
乙脫氫酶1(ADH1)elisa試劑盒英文名稱:ADH1 ELISA Kit磷化癌易感基因1抗體包裝1g
胰腺再生蛋白Ⅳ(REG4)elisa試劑盒英文名稱:REG4 ELISA Kit磷化癌易感基因1抗體包裝5g
胰高血糖素樣肽1受體(GLP1R)elisa試劑盒英文名稱:GLP1R ELISA Kit磷化上皮鈣粘附分子抗體包裝100g
胰高血糖素樣肽1(GLP1)elisa試劑盒英文名稱:GLP1 ELISA Kit磷化癌易感基因1抗體包裝25g
胰多肽(PP)elisa試劑盒英文名稱:PP ELISA KitBRD2蛋白抗體包裝500g
胰淀素(IAPP)elisa試劑盒英文名稱:IAPP ELISA KitBRD3蛋白抗體包裝5g
胰淀粉酶α2(AMY2)elisa試劑盒英文名稱:AMY2 ELISA Kit磷化酪蛋白激酶6/腫瘤激酶抗體包裝1g
胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7)elisa試劑盒英文名稱:IGFBP7 ELISA Kit磷化蛋白酪激酶ATK抗體包裝250mg
去整合素樣金屬蛋白酶20抗體白介素21(IL21)Binimetinib (MEK162, ARRY-162, ARRY-438162) is a potent inhibitor of MEK1/2 with
Ki67細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)
其他異煙酰肼;雷米風(fēng);利抓哉;γ-吡啶甲酰肼;4-吡啶乙酰肼;吡啶-4-甲酰肼;4-吡啶羧肼;4-吡啶甲酰肼;雷米封;
英文名稱:INAH
其他英文名稱:Isonicotinic acid hydrazide;Isoniazid; Pyridine-4-carbohydrazide
產(chǎn)品規(guī)格:BR,98%
包裝:100克
CAS號:54-85-3
C6H7N3O=137.1
級別:BR
含量:≥98.0%
PH:6.8~8.0
熔點:171.2~172.5℃
重金屬:≤10ppm
用途:生化研究。晶狀體醛糖還原酶的抑制劑。也用作食品抗氧劑和色素
保存:RT,避光