培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
GSK2194069是有效和特異的β-酮酰還原酶(KR)抑制劑,在檢測(cè)釋放CoA實(shí)驗(yàn)中的IC50分別為7.7±4.1nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1332331-08-4 純度:98.0% 分子量:428.48 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
紅色鹽幾何形菌Lysinibacillus sphaericus魚孕激/孕
構(gòu)巢曲霉Lysinibacillus sphaericus鮭魚降鈣(SCT)ELISA試劑盒
玫瑰單胞菌Bacillus thuringiensis鮭魚降鈣(SCT)ELISA試劑盒
釀酒酵母Bacillus thuringiensis魚類甲狀腺(T4)ELISA試劑盒
蘑菇屬Bacillus thuringiensis魚類甲狀腺(T4)ELISA試劑盒
舌狀炭角菌Bacillus thuringiensis魚雌二
美澳型核果褐腐病菌Bacillus thuringiensis魚雌二
根霉Bacillus thuringiensis魚促腎上腺皮質(zhì)激
蒼白色鏈霉菌Bacillus thuringiensis魚促腎上腺皮質(zhì)激
空腸彎曲桿菌Bacillus thuringiensis魚雌激
蘇云金芽胞桿菌柏氏變種Bacillus thuringiensis魚雌激
香菇*Bacillus thuringiensis魚促卵泡
棒束青霉Bacillus thuringiensis魚促卵泡
湖北擬酵母Bacillus thuringiensis魚促黃體激
秀珍菇Bacillus thuringiensis魚促黃體激
枯草芽孢桿菌Bacillus thuringiensis魚磷化腺苷活化蛋白激
磷化細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子p100抗體瓜硫桿狀菌
磷化1型神經(jīng)纖維瘤抗體瓜枝孢(黃瓜黑星病菌)痢疾志賀菌
磷化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體玉蜀黍赤霉(麥類赤霉病菌)紅城紅球菌
磷化谷受體2B抗體第九矛束霉擬威克酵母
β-酮酰還原酶(KR)抑制劑(GSK2194069)L-蘇
其他L-α-基-β-羥基??;L-羥基?。?2S,3R)-2-基-3-羥基??;L-異赤絲藻基;丁羥
英文名稱:L-Threonine
其他英文名稱:L-α-Amino-β-hydroxybutyric acid;L-2-Amino-3-hydroxybutanoic acid; L-β-Hydroxy-2-aminobutyric acid;(2S,3R)-2-Amino-3-hydroxybutyric acid;(2S,3R)-(-)-Threonine
產(chǎn)品規(guī)格:BR,99%
包裝:10克/100克/500克
CAS號(hào):72-19-5
C4H9NO3=119.13
≥99.0%
比旋光度:-27.0~-29.0 o
PH:5.2~6.2
重金屬:≤10ppm
干燥失重:≤0.2%
性狀:結(jié)晶體或結(jié)晶粉末。溶于水,不溶于無水乙和。熔點(diǎn)255~257℃(分解)。半數(shù)致死量(大鼠,腹腔)3098mg/kg
用途:生化研究。制備組織培養(yǎng)基
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