化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1972 | 主要用途 | 僅供科研實驗 |
| 組織來源 | 眼組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
詳細介紹
小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞
培養(yǎng)基：ECM基礎培養(yǎng)基：，F(xiàn)BS，Penicillin，Streptomycin等；
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
傳代特性：不建議傳代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞分離自眼組織；視網(wǎng)膜色素上皮為一層矮六角棱柱狀細胞，高8～10μm，寬12～18μm。細胞頂部伸出許多長5～7μm的突起。在胚胎發(fā)生時，上皮基部和脈絡膜緊密連接，但頂部與視細胞連接不緊，故易在此發(fā)生視網(wǎng)膜剝離。電鏡觀察，細胞之間有緊密連接、中間連接和縫隙連接，基底部有胞膜內(nèi)褶和線粒體，故推測色素上皮有運輸離子和屏障作用。胞核圓形，位于細胞基部。頂部胞質(zhì)含許多橢圓或圓形的黑色素顆粒和含板層碎片的殘余體?；鎯?nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達，分布于色素顆粒和殘余體之間。有高爾基復合體、溶酶體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和脂滴。這些結構反映了色素上皮的多種功能：①色素顆粒由粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)生，經(jīng)高爾基復合體轉運至胞質(zhì)頂部。已知兩棲類和魚類受強光照射時，色素顆粒移入突起中；處于黑暗時，色素顆粒又回到胞質(zhì)中，這說明色素上皮有吸收光和保護視細胞免受強光刺激的作用；②脂滴有集聚和貯存維生素A的作用，通過滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的酯化與轉運，參與視細胞合成視紫紅質(zhì)；③能吞噬脫落的視桿細胞外節(jié)膜盤，藉溶酶體酶水解消化，形成殘余體；④分泌蛋白多糖，粘合和維持視桿、視錐與色素上皮的相互位置關系，從而保證視紫紅質(zhì)的更新和營養(yǎng)物質(zhì)的傳遞。
一、細胞基本屬性
細胞名稱 | 小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞 | 商品貨號 | A01X1972 |
組織來源 | 眼組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。
實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
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注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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