詳細(xì)介紹
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱(chēng):Caspase 8熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)
英文名稱(chēng):Caspase-8 Fluorescence Metric Assay
產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織Caspase-8 檢測(cè)。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著非常重要的作用,其中Caspase-8 為關(guān)鍵的執(zhí)行分子,與DNA 斷裂、染色質(zhì)凝聚和凋亡小體形成有關(guān)。Caspase-8 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒(méi)有活性;但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段,它被激活,活化的Caspase-8 由兩個(gè)大亞基和兩個(gè)小亞基組成,裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase-8 熒光檢測(cè)試劑盒就是將Caspase-8 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán)。當(dāng)?shù)孜锉籆aspase-8 剪切后,發(fā)色基團(tuán)即游離出來(lái),可通過(guò)熒光酶標(biāo)儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)=485nm,發(fā)射波長(zhǎng)=535nm)。 |
注意事項(xiàng)
1. Caspase-8 Substrate 避光保存及使用。
2. 對(duì)某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-8 活化的機(jī)制,這種情況時(shí)利用本試劑盒檢測(cè)Caspase-8 活性無(wú)明顯改變,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號(hào)通路。
3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個(gè)或新鮮組織50~100mg,以便能達(dá)到測(cè)定需要的100~200μg 蛋白的要求,因?yàn)镃aspase-8 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測(cè)定的RFU 值偏低,可以通過(guò)適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)的時(shí)間,如果值還是不高,可通過(guò)增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來(lái)提高蛋白量。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(FGF4)elisa試劑盒英文名稱(chēng):FGF4 ELISA Kit艾滋病病制約錨定蛋白抗體包裝5g
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子13(FGF-13)elisa試劑盒英文名稱(chēng):FGF-13 ELISA Kit腺苷環(huán)化酶1抗體包裝1g
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10(FGF10)elisa試劑盒英文名稱(chēng):FGF10 ELISA Kit核糖核酶L抑制蛋白抗體包裝5g
超氧化物歧化酶(SOD)elisa試劑盒英文名稱(chēng):SOD ELISA KitRho GTP酶激活蛋白24抗體包裝25g
超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)elisa試劑盒英文名稱(chēng):hs-CRP ELISA KitGTP酶激活蛋白ASAP3抗體包裝5g
腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)elisa試劑盒英文名稱(chēng):iFABP ELISA Kit激活素受體1C抗體包裝25g
叉頭框蛋白03(FoxP3)elisa試劑盒英文名稱(chēng):FoxP3 ELISA Kit整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶13型抗體包裝1g
層連蛋白/板層素(LN)elisa試劑盒英文名稱(chēng):LN ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶11抗體包裝25g
草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAT)elisa試劑盒英文名稱(chēng):PAT ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶12抗體包裝5g
不對(duì)稱(chēng)二基精(ADMA)elisa試劑盒英文名稱(chēng):ADMA ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶15抗體包裝1g
補(bǔ)體因子H(CFH)elisa試劑盒英文名稱(chēng):CFH ELISA Kit去整合素樣金屬蛋白酶2抗體包裝25g
補(bǔ)體片斷5a(C5a)elisa試劑盒英文名稱(chēng):C5a ELISA Kit載脂蛋白E2受體抗體包裝5g
補(bǔ)體片斷3a(C3a)elisa試劑盒英文名稱(chēng):C3a ELISA Kit腺苷A1受體抗體包裝100g
補(bǔ)體蛋白5(C5)elisa試劑盒英文名稱(chēng):C5 ELISA Kit通道蛋白0抗體包裝1g
補(bǔ)體蛋白4(C4)elisa試劑盒英文名稱(chēng):C4 ELISA Kit轉(zhuǎn)錄因子AP-2γ抗體包裝25g
淀粉樣肽前體蛋白抗體結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)Isoindigotin is used in the therapy of Y.
Caspase 8熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)玉米烯酮
其他玉米赤霉烯酮;赤霉烯酮
英文名稱(chēng):Zearalenone
其他英文名稱(chēng):[S-(E)]-3,4,5,6,9,10-Hexahydro-14,16-dihydroxy-3-methyl-1H-2-benzoxacyclotetradecin-1,7(8H)-dione
產(chǎn)品規(guī)格:BR,98%
包 裝: 10毫克/25毫克
CAS號(hào):17924-92-4
C18H22O5=318.36
級(jí)別:BR
含量:≥98%
干燥失重:5~8.5%
重金屬:≤20ppm
性狀:淺黃色粉末,well soluble in dilute solutions of alkali hydroxides or carbonates用途:生化研究。