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技術(shù)文章

ATCC細胞分類檢測步驟

閱讀:276          發(fā)布時間:2021-3-5

ATCC細胞檢測步驟:

【 樣本儲存 】:收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70℃可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。

【試劑盒成分】:人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬;植物細胞因子、骨代謝、細胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。 主要用于科研方面,不用于臨床診斷。可以用于檢測各種指標。

ATCC細胞操作方法:

(1)取成年新西蘭大白兔,耳緣靜脈注射空氣處死后,取下兔子的雙腿,立即用75%乙醇浸泡。

(2)移入細胞房內(nèi),去除雙腿表面的皮毛及肌肉,剪取關(guān)節(jié)段,移至超菌工作臺內(nèi)。

(3)PBS洗滌數(shù)次,用手術(shù)刀或彎剪將關(guān)節(jié)表面的軟骨組織取下。

(4)軟骨組織塊靜置5min,棄去上層液體及懸浮組織,將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化15-20min;

(5) 4℃靜置5min;棄上清,PBS洗滌,去上清。加入0.2%膠原酶II,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化2H;
(6)加入生長培養(yǎng)基終止消化,反復(fù)吹打后依次通過200目濾網(wǎng)。收集濾液,1200rpm離心8min,棄上清,用DMEM*培養(yǎng)基重新懸浮細胞, 放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

(7)細胞傳代后放入預(yù)置有薄骨片或蓋玻片的培養(yǎng)板中進行培養(yǎng)。細胞*展開后即可固定做原代鑒定。

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