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技術(shù)文章

抗體保存相關(guān)問題解答

閱讀:103          發(fā)布時間:2024-10-21

      抗體(antibody,Ab)是機(jī)體在體內(nèi)存在的外來分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下,由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig),主要分布在血清中,也分布于組織液及外分泌液中。

    抗體保存得當(dāng)與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當(dāng),大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。請謹(jǐn)記無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體.

一、一般抗體的保存方法

1. 收到抗體后請務(wù)必在 12000rpm 離心 1-5 分鐘后再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul,請延長離心時間至 5 分鐘,以保證全部抗體均離心下來)!

2. 對于大部分抗體,比較合適的保存方式是分裝后保存在-20℃或-80℃。

對絕大多數(shù)抗體來說,保存在-20℃是全足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會有更多的好處!

分裝可以大程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害,同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。分裝的量以一次實驗用完為好,最少不能少于 10ul每份。因為分裝體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來!抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,在4℃盡量不要超過1天。絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層,而不是門上。

3. 大部分抗體收到后 4℃短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的。

如果抗體很快(1-2 周)會使用,推薦在4℃保存,這是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則最好是在-20℃ or -80℃。最關(guān)鍵的一點是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體!

但是,腹水形式的產(chǎn)品請在收到后立即凍起來!因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長期在4℃保存會導(dǎo)致抗體的降解!

4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件:一般的運(yùn)輸過程需要1-2周的時間,所以是在4℃的條件下來完成的。4℃運(yùn)輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害(如果使用干冰運(yùn)輸,那么收到時抗體是凍起來的,為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程)。 所以運(yùn)輸過程中絕對避免干冰運(yùn)輸!

二、特殊抗體的保存條件:

1.酶聯(lián)抗體:永遠(yuǎn)保存在 4℃,避免凍起來。否則會導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失。

2.偶聯(lián)抗體:所有偶聯(lián)抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4℃保存。尤其是熒光抗體,對光極為敏感,因此在所有的實驗階段也是要避光操作的!

3.IgG3 的同型對照:永遠(yuǎn)保存在4℃,避免凍起來。因為如果出現(xiàn)凍融過程,該抗體非常容易形成多聚體(無論是保存還是運(yùn)輸,絕對避免反復(fù)凍融),反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體變性,導(dǎo)致多聚體形成,從而降低抗體的結(jié)合能力!

三、抗體保存其它相關(guān)信息:

1.關(guān)于加入甘油保存:

有些人會加 50%的甘油到抗體中來避免反復(fù)凍融,甘油在-20℃會降低冰點。這對很多抗體可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因為這已經(jīng)超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話,請謹(jǐn)慎注意無菌操作,避免污染!

2.關(guān)于蛋白保護(hù)劑:

蛋白在高濃度時更不容易降解(1 mg/ml 或者更高),這就是為什么在抗體中加入 BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。

關(guān)于NaN3(sodium azide)的使用:

3.為了防止微生物污染,NaN3經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度 0.02% (w/v))。NaN3

在下述情況中不能使用NaN3

(1)如果抗體用于染色或處理活細(xì)胞,用于體內(nèi)研究:

(2)NaN3在抵抗微生物的同時,對其它大部分有機(jī)物也是有毒的, 因為它阻斷了線粒體的 cytochrome electron transportsystem.

(3)要偶聯(lián)帶有氨基基團(tuán)的抗體:NaN3會干擾任何含有氨基基團(tuán)的偶聯(lián),因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前,應(yīng)將NaN3去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入NaN3保存,但是濃度只能是0.01%。對于需要偶聯(lián)的抗體,thimerosal (merthiolate)可以替代NaN3作為保護(hù)劑!

4.NaN3的去除方式:

可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除!IgG 的分子量是 150kDa (IgM 是~ 600kDa); NaN3的分子量只有65Da。使用 cut off 14kDa 的濾膜即可將NaN3從抗體中去除。


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