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蛋白質(zhì)純化中PMSF有什么作用

2023-3-9 閱讀(1729)

生物蛋白質(zhì)的細(xì)胞水平在其自然狀態(tài)或溫和的環(huán)境條件下是穩(wěn)定的。體外研究和實驗將破壞蛋白質(zhì)的細(xì)胞力學(xué),導(dǎo)致降解和變性。蛋白酶抑制劑(如PMSF)將通過減輕酶促反應(yīng)在研究期間保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定或純化。在裂解過程中,細(xì)胞細(xì)胞器可能會面臨通常抑制蛋白酶反應(yīng)的調(diào)節(jié)機(jī)制的破壞。該反應(yīng)通過蛋白水解導(dǎo)致各種蛋白質(zhì)的分解。結(jié)果,研究人員可能會在該過程中丟失感興趣的蛋白質(zhì),這會影響發(fā)現(xiàn)的準(zhǔn)確性。通常將PMSF和AEBSF應(yīng)用于蛋白質(zhì)純化過程,因為細(xì)胞和組織中的大多數(shù)蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶組。因此,PMSF是基于絲氨酸實驗的裂解緩沖液中的重要組成部分。 PMSF的加入減少了由于酶反應(yīng)引起的樣品污染,并為研究提供了更高濃度的功能性蛋白質(zhì)。
可以將PMSF添加到抑制劑混合物或蛋白酶抑制劑混合物中,為裂解物樣品提供全面的保護(hù),使其免受所有四種催化蛋白酶的酶促作用:絲氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸和金屬。




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