FeRhoNox-1 (Fe2+indicator) 亞鐵離子熒光探針

一、產(chǎn)品簡介:
FeRhoNox-1，也稱為RhoNox-1，是一種活躍的熒光探針，特異性檢測不穩(wěn)定的鐵(II)離子（Fe2+）。一旦與Fe2+反應(yīng)后，不可逆的生成一種橙色（紅色）熒光產(chǎn)物（Absmax=540nm，F(xiàn)Lmax=575nm，圖1.FeRhoNox-1的光譜特征）。生理濃度下的鐵（III）離子（Fe3+）或其它除鐵離子以外的二價金屬離子都不會使其熒光增強（見圖2FeRhoNox-1的選擇性）.FeRhoNox-1的反應(yīng)特異性）。FeRhoNox-1具細胞膜滲透性和高選擇性，適用于活細胞內(nèi)Fe2+的檢測，傾向定位在高爾基體。

圖1. FeRhoNox-1的光譜特征。FeRhoNox-1與Fe2+反應(yīng)后吸收和發(fā)射光譜（上）。FeRhoNox-1在37℃，與Fe2+反應(yīng)1h后，熒光明顯增強。最大熒光峰約在575nm。

圖2. FeRhoNox-1的選擇性。FeRhoNox-1僅與Fe2+反應(yīng)。

 

保存及運輸：-20℃避光干燥保存，至少1年有效。運輸：冰袋運輸。

 

二、操作步驟

1.需要自行準備的材料

1.1細胞培養(yǎng)級或超純DMSO（CAT：#FS0306）【強烈建議將高純的DMSO分裝成單次用量保存在極低溫冷凍室內(nèi)，比如-80℃，避免吸潮。降解的DMSO可能會增加FeRhoNox-1的背景信號】

1.2合適的清洗和觀察緩沖液（比如：PBS, pH 7.4；HBSS；等）。[注意]不要含有酚紅。

2.探針準備

2.1從冰箱取出FeRhoNox-1，置于室溫回溫至少30min，將其置于微量離心機內(nèi)低速離心。將瓶內(nèi)的粉末離心到管底后，再開蓋。

2.2往一管FeRhoNox-1（50μg）內(nèi)加入109μl高質(zhì)量DMSO，用槍反復(fù)吹吸5次或以上，使其*溶解即得到1mMFeRhoNox-1儲存液。建議單次用完儲存液，若實在用不完，請根據(jù)單次用量分裝，置于-80℃避光保存。用中性緩沖液來稀釋儲存液。

2.3于正式實驗前，用HBSS或其他中性緩沖液來稀釋1mMFeRhoNox-1儲存液到所需工作濃度（比如：5μM），工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，盡快用完。

3.染色步驟
3.1從玻璃底培養(yǎng)皿上培養(yǎng)的細胞中吸掉培養(yǎng)液。
3.2吸掉上清液，用 HBSS 清洗細胞 2 次。
3.3加入含5μM  FeRhoNox-1的染色工作液，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育60min。
3.4在熒光顯微鏡下觀察細胞。

4.熒光檢測

對于熒光激發(fā)：通用的綠色激發(fā)濾片比如Cy3或四甲基羅丹明（TMR）檢測用的濾片。

對于激光激發(fā)：532nm或543nm激光器比較適合。發(fā)射波長為570nm左右。

注意事項

1)FeRhoNox-1傾向定位在高爾基體，但也可能檢測細胞質(zhì)池內(nèi)的Fe2+，目前針對這一點未做明確評估。

2)酸性溶液會氧化FeRhoNox-1，嚴重影響探針的效率。

3)熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4)為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

附錄F eRhoNox-1的染色示例

I. HepG2細胞 圖3. FeRhoNox-1在HepG2活細胞內(nèi)的成像檢測。①-Fe(II)：細胞未添加亞鐵離子（100μM硫酸亞鐵銨）；②+Fe(II)：細胞加載亞鐵離子；③+Fe(II)+Bpy：細胞加載亞鐵離子，之后用加入鐵離子螯合劑Bpy。圖②熒光增強，而圖③熒光降低。此結(jié)果與FeRhoNox-1特異性檢測Fe(II)的特征一致。