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光度計(jì)工作原理

閱讀:1437        發(fā)布時(shí)間:2019-5-14

導(dǎo)讀:

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。

光度計(jì)特點(diǎn):

1.采用微機(jī)控制并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2.用干涉濾光片作為分光元件,光電管進(jìn)行光電轉(zhuǎn)換。

3.具有鉀、鈉濃度直讀,曲線擬合,靈敏度漂移,自動(dòng)校正,自動(dòng)調(diào)滿度?;鹧婺芰恐甘荆僮魇д`顯示,打印結(jié)果等功能。

4.線性穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好,尤其適合臨床應(yīng)用。

分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。

而分光光度法則是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。 常用的波長(zhǎng)范圍為:(1)200~400nm的紫外光區(qū),(2)400~760nm的可見(jiàn)光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)光分光光度計(jì)(或比色計(jì))、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測(cè)量的精密度和準(zhǔn)確度,所有儀器應(yīng)按照國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進(jìn)行校正檢定。 單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí),被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(zhǎng)度)成正比,其關(guān)系如下式:

  A=-log(I/I。)=-lgT=kLc

  式中 :A 為吸收度;

  I。為入射的單色光強(qiáng)度;

  I 為透射的單色光強(qiáng)度;

  T 為物質(zhì)的透射比;

  k 為吸收系數(shù);

  L 為被分析物質(zhì)的光程

  c 為物質(zhì)的濃度

物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng),以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區(qū),除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。

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